Anticorpo policlonal de coelho anti-GSDMD (comprimento total + terminal N) para WB, IF/ICC, ELISA - Q9D8T2

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da Gasdermina-D

• A Gasdermina-D é um precursor de proteína formadora de poros: após a clivagem pelas caspases inflamatórias (CASP1, CASP4/CASP11), o fragmento N-terminal oligomeriza-se para formar poros na membrana, desencadeando a piroptose e a liberação das formas maduras da interleucina-1 (IL-1β e IL-18). Referências relacionadas: PMID:26375003, PMID:26375259, PMID:26611636
• O domínio N-terminal liga-se especificamente aos lipídios do folheto interno, incluindo fosfatidilinositóis monofosforilados e bisfosforilados, ácido fosfatídico e cardiolipina, enquanto não se liga ao fosfatidilinositol não fosforilado, à fosfatidiletanolamina ou à fosfatidilcolina. Referências relacionadas: PMID:27339137, PMID:27383986
• Os poros formados pela Gasdermina-D (com diâmetro interno de 10–15 nm) também mediam a liberação de DNA mitocondrial e da caspase-7 madura (CASP7); os fragmentos N-terminais extracelulares podem matar diretamente bactérias Gram-negativas e Gram-positivas por meio da especificidade de ligação a lipídios. Referências relacionadas: PMID:37001519, PMID:35705808, PMID:27383986
• Em determinadas condições, a Gasdermina-D clivada atua como coativadora da transcrição: ela se transloca para o núcleo e coopera com STAT1 para induzir CIITA e moléculas de MHC de classe II, mantendo a tolerância alimentar no intestino delgado. Referência relacionada: PMID:37327784
• A clivagem por alérgenos, como a papaína, também ativa a Gasdermina-D, levando à liberação específica da interleucina-33 (IL-33) e promovendo uma resposta imune inflamatória do tipo 2. Referências relacionadas: PMID:35749514, PMID:35794369
• A localização subcelular inclui o citosol, o inflamassoma, a membrana celular, a membrana mitocondrial e o núcleo, dependendo do estado de ativação.
• Especificidade tecidual: altamente expressa nas células endoteliais do cérebro.
• As principais modificações pós-traducionais incluem palmitoilação, fosforilação e formação de ligações isopeptídicas; classificada nas categorias de imunidade, inflamassoma e necrose.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 80–163 da GSDMD de camundongo clivada, correspondendo a parte do domínio N-terminal formador de poros; essa região é conservada entre humanos, camundongos e ratos, promovendo ampla reatividade.
• Para western blot (WB), espera-se detectar a GSDMD de comprimento total a aproximadamente 53 kDa e o fragmento N-terminal clivado entre aproximadamente 30–35 kDa após a ativação do inflamassoma. Valide os padrões das bandas no seu sistema de amostras utilizando controles positivos e negativos apropriados.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), considere o uso de ativadores do inflamassoma (por exemplo, LPS mais nigericina) para induzir a clivagem da GSDMD e observar a translocação do citosol para a membrana plasmática. A coloração conjunta com marcadores de membrana ou de piroptose pode ajudar a confirmar a formação de poros.
• O anticorpo é adequado para ELISA, mas as condições ideais de revestimento e as faixas de detecção devem ser determinadas empiricamente para cada formato de ensaio.

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