Anticorpo Monoclonal Anti-GSK-3α/β para WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P49840/P49841

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de GSK-3α/β

• GSK-3α e GSK-3β são quinases de serina/treonina constitutivamente ativas que fosforilam e inativam a glicogênio sintase (GYS1/GYS2), regulando negativamente a síntese de glicogênio e a homeostase da glicose.
  Referências relacionadas: PMID:11749387, PMID:17478001, PMID:19366350
• Elas desempenham um papel fundamental na via de sinalização Wnt/β-catenina ao fosforilar a β-catenina (CTNNB1), promovendo sua ubiquitinação e degradação proteassomal, o que inibe a transcrição de genes alvo de Wnt.
  Referências relacionadas: PMID:17229088
• GSK-3α contribui para a patogênese da doença de Alzheimer ao facilitar o processamento da proteína precursora amiloide (APP) e a geração de placas amiloides neurotóxicas.
  Referências relacionadas: PMID:12761548
• As quinases estão envolvidas na sinalização da insulina: elas podem mediar o desenvolvimento da resistência à insulina regulando fatores de transcrição que controlam genes metabólicos.
  Referências relacionadas: PMID:10868943, PMID:17478001
• GSK-3α regula a autofagia ao fosforilar a acetiltransferase KAT5/TIP60 em condições de privação de nutrientes, que por sua vez acetila e ativa proteínas autofágicas chave como ULK1 e RUBCNL.
  Referências relacionadas: PMID:30704899
• Ambas as isoformas apresentam um domínio quinase N-terminal com sítios de ligação a ATP e a nucleotídeos, e sua atividade é modulada por quinases a montante através da fosforilação em resíduos de serina específicos do terminal N (Ser21 para GSK-3α, Ser9 para GSK-3β). A desregulação está associada a diabetes, neurodegeneração e câncer.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, espere bandas de aproximadamente 46 kDa (GSK-3α) e 48 kDa (GSK-3β) em lisados de células ou tecidos de humano, camundongo ou rato. Use SDS-PAGE padrão e membranas de nitrocelulose/PVDF.
• Em imunofluorescência (IF/ICC) e imunohistoquímica (IHC), permeabilize as células ou desparafinize e faça a recuperação de antígeno adequadamente, pois GSK-3α/β são predominantemente citoplasmáticos, mas também podem se localizar nos núcleos. Valide a especificidade do sinal com controles positivos e negativos conhecidos.
• Para ELISA, considere um formato sanduíche usando este anticorpo de captura pareado com um anticorpo de detecção que reconheça um epítopo diferente. Titule as concentrações do anticorpo para otimizar a relação sinal-ruído.
• O imunógeno de proteína recombinante indica que o anticorpo pode reconhecer tanto as formas fosforiladas quanto não fosforiladas. Verifique o reconhecimento do estado de modificação desejado tratando as amostras com moduladores (por exemplo, insulina ou Wnt3a para induzir a fosforilação, ou inibidores de fosfatase para preservar os estados endógenos).
• A reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato é relatada; no entanto, sempre confirme a reatividade no seu sistema modelo específico, pois os níveis de expressão e as modificações pós-traduccionais podem variar.

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