Anticorpo Monoclonal Anti-HADHB (Coelho) para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P55084

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Subunidade beta da Enzima Trifuncional, Mitocondrial

• HADHB (TP-beta) codifica a subunidade beta da enzima trifuncional mitocondrial, um complexo heterotetramérico que catalisa os três passos finais da β-oxidação de ácidos graxos de cadeia longa. A subunidade alfa (HADHA) contribui com as atividades enoil-CoA hidratase e hidroxiacil-CoA desidrogenase, enquanto a HADHB realiza a tiólise do 3-cetoacil-CoA. Referências relacionadas: PMID:16423905, PMID:26474213, PMID:29915090
• Cada ciclo de β-oxidação remove dois carbonos da cadeia de acil-CoA graxo, produzindo acetil-CoA, FADH₂ e NADH. Esses transportadores de elétrons impulsionam a síntese de ATP via ciclo do ácido cítrico e fosforilação oxidativa, atendendo às altas demandas de energia em tecidos como coração e músculo. Referências relacionadas: PMID:26474213, PMID:29915090
• A enzima trifuncional atua preferencialmente em substratos de cadeia longa, incluindo ácidos graxos saturados como palmitato e laurato. Evidências experimentais confirmam atividade tiolase contra substratos selecionados, e seu mecanismo catalítico sugere atividade em ácidos graxos insaturados como oleato, linoleato e linolenato. Referências relacionadas: PMID:1550553, PMID:8135828, PMID:8163672, PMID:30850536
• A HADHB localiza-se na membrana mitocondrial interna, membrana mitocondrial externa e retículo endoplasmático, indicando um papel dinâmico no metabolismo lipídico através de sítios de contato de organelas.
• Modificações pós-traducionais incluem acetilação, e o splicing alternativo gera múltiplos isoformas. Mutações na HADHB estão ligadas à deficiência da proteína trifuncional mitocondrial, um distúrbio metabólico grave.
• A proteína tem um peso molecular calculado de aproximadamente 51,3 kDa (observado ~51 kDa) e é conservada entre humano, camundongo e rato.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 331–474 da HADHB humana, uma região conservada em camundongo e rato; isso provavelmente explica a reatividade cruzada entre espécies relatada. Para experimentos específicos de espécie, confirme o alinhamento de sequência e valide a detecção em lisados de tecido relevantes.
• Para Western blot, considere usar frações enriquecidas em mitocôndrias de tecido cardíaco ou hepático e uma diluição de anticorpo primário recomendada entre 1:1000 e 1:5000, otimizando para o seu tipo de amostra.
• Em IHC-P, a recuperação antigênica (ex.: tampão citrato, pH 6.0) pode ser necessária. Inclua um controle positivo de tecido conhecido, como músculo cardíaco.
• Para IF/ICC, a coloração conjunta com um marcador mitocondrial (ex.: TOM20) é aconselhável para verificar a localização. A permeabilização com Triton X-100 ou digitonina pode ser necessária.
• Quando usado em ELISA, emparelhe com um anticorpo de detecção correspondente para ensaios sanduíche. Avalie a reatividade cruzada com outros membros da família da tiolase, se relevante.

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