Anticorpo policlonal de coelho anti-Spike S2 de HCoV-OC43 para WB, ELISA - P36334

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da glicoproteína Spike

• A glicoproteína Spike (S), também designada E2 ou proteína peplômero, é uma proteína viral de fusão de classe I que reveste a superfície dos vírions de HCoV-OC43.
• A subunidade S1 medeia a ligação inicial às células hospedeiras por meio da interação com receptores que contêm ácido siálico, um determinante fundamental do tropismo viral.
• Após a interação com o receptor e a endocitose do vírus, a subunidade S2 sofre mudanças conformacionais acentuadas; suas regiões de repetição heptádica formam um trímero de grampos que impulsiona a fusão das membranas endossomais viral e hospedeira.
• A Spike é sintetizada como um precursor e clivada proteoliticamente em S1 e S2; o peptídeo de fusão interno dentro de S2 é exposto após a clivagem, permitindo a fusão de membranas.
• Durante a montagem viral, a proteína localiza-se na membrana do vírion, na membrana da célula hospedeira e na membrana do compartimento intermediário entre o retículo endoplasmático e o complexo de Golgi (ERGIC).
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação ligada a N, ligações dissulfeto que estabilizam a estrutura de pré-fusão e palmitoilação, que ancora a proteína na bicamada lipídica.
• Como um fator de virulência fundamental que medeia tanto a ligação quanto a entrada nas células hospedeiras, a Spike é um dos principais alvos para anticorpos neutralizantes e para o desenvolvimento de reagentes diagnósticos.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O peptídeo imunógeno está localizado dentro da subunidade S2 (aa 782–881); portanto, espera-se que o anticorpo reconheça tanto a Spike de comprimento completo (~150 kDa) quanto o produto de clivagem S2 em condições redutoras.
• Para WB, considere utilizar lisado de células infectadas com HCoV-OC43 como controle positivo; a glicosilação pode fazer com que a banda migre com um peso molecular aparente mais elevado.
• Devido à sua natureza policlonal, o anticorpo pode proporcionar uma ampla cobertura de epítopos em ELISA; no entanto, a reatividade cruzada com outros coronavírus deve ser avaliada empiricamente.
• Como uma glicoproteína transmembrana, a Spike requer detergentes apropriados para a extração; evite a fervura prolongada das amostras para prevenir a agregação.

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