Anticorpo Monoclonal Anti-HFE para WB, ELISA - Q30201

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HFE

• O HFE (Proteína da Hemocromatose Hereditária), também referido como HLA-H, é uma proteína de membrana que se liga ao receptor de transferrina (TFR) e reduz a sua afinidade para a transferrina carregada de ferro, regulando assim a captação de ferro.
• O gene que codifica o HFE pertence à família MHC de classe I; mutações no HFE estão associadas à hemocromatose hereditária, um distúrbio de sobrecarga de ferro, consistente com a sua classificação como uma variante de proteína de doença.
• De acordo com a UniProt, o HFE é expresso em todos os tecidos testados, exceto no cérebro, indicando uma distribuição ampla, mas não onipresente.
• A nível subcelular, o HFE localiza-se na membrana celular, onde interage com o TFR e outras proteínas relacionadas com o ferro para controlar a homeostase sistémica do ferro.
• O splicing alternativo do HFE produz múltiplas isoformas, que podem ter distribuições teciduais e papéis funcionais distintos; a forma completa ligada à membrana é a espécie principal.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação e formação de ligações dissulfeto, que são críticas para o dobramento adequado e a expressão na superfície celular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio corresponde a um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 249–348 do HFE humano, uma região que inclui parte do domínio extracelular, a hélice transmembranar e a cauda citoplasmática. Este design pode permitir a deteção de formas completas e certas formas truncadas em Western blot desnaturante.
• Para Western blotting, considere usar lisados de proteína total de tecidos que expressam HFE, como fígado ou placenta (excluindo o cérebro, onde o HFE está ausente). Otimize as condições de bloqueio e diluição do anticorpo para o seu tipo específico de amostra.
• Para aplicações de ELISA, o desempenho do anticorpo pode depender do formato do ensaio (direto, indireto ou sanduíche). Valide o clone na sua matriz de amostra alvo e considere o emparelhamento com um anticorpo de captura que reconheça um epítopo distinto.
• Como o HFE é uma proteína de membrana, garanta uma solubilização e desnaturação adequadas durante a preparação da amostra para expor o epítopo, particularmente se o imunogénio for parcialmente intracelular.
• A reatividade cruzada é reportada para o HFE humano; para uso com outras espécies, a homologia da sequência deve ser verificada.

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