Anticorpo Monoclonal Anti-HIBADH para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P31937

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HIBADH

• HIBADH (3-hidroxiisobutirato desidrogenase) é uma enzima mitocondrial pertencente à família das oxirredutases, utilizando NAD como cofator.
• Desempenha um papel fundamental no catabolismo de aminoácidos de cadeia ramificada (valina, leucina, isoleucina), especificamente na conversão de 3-hidroxiisobutirato em semialdeído metilmalonato.
• A proteína está localizada na mitocôndria, conforme indicado pelo seu peptídeo de trânsito mitocondrial, que é clivado para produzir a enzima madura.
• Modificações pós-traducionais incluem acetilação, que pode regular sua atividade enzimática ou estabilidade.
• A expressão de HIBADH foi detectada em fibroblastos da pele; sua expressão em outros tecidos pode ser inferida pelo seu papel metabólico.
• Estudos estruturais forneceram uma estrutura 3D para o HIBADH, auxiliando na compreensão do seu mecanismo catalítico e reconhecimento de substratos.
• A proteína foi identificada através de sequenciamento direto de proteínas e abordagens de proteômica, confirmando a sua presença em mitocôndrias humanas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 37-336 do HIBADH humano (NP_689953.1), o que exclui o peptídeo de trânsito mitocondrial previsto (aproximadamente os primeiros 36 aminoácidos); portanto, é provável que o anticorpo reconheça a forma mitocondrial madura.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda em aproximadamente 35 kDa (consistente com o peso molecular de 35,3 kDa no UniProt). Confirme a especificidade usando controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, células ou tecidos com superexpressão de HIBADH ou com expressão conhecida).
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), devem ser observados padrões de coloração mitocondrial. A co-localização com marcadores mitocondriais pode ajudar a validar a especificidade.
• O anticorpo reage de forma cruzada com HIBADH humano, de camundongo e de rato; ao usar amostras de roedores, verifique a homologia da sequência na região do imunógeno para garantir reatividade comparável.
• Para aplicações de ELISA, considere usar o imunógeno recombinante como controle positivo e titule a concentração do anticorpo para uma relação sinal-ruído ideal.
• Para minimizar a ligação inespecífica, recomenda-se o uso de tampões de bloqueio adequados (por exemplo, 5% de leite desnatado ou BSA) e otimização da diluição apropriada.

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