Anticorpo monoclonal de coelho anti-HIF1α para WB, IF/ICC, ELISA - Q16665

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da HIF1α

• A HIF1α é um regulador transcricional principal da resposta adaptativa à hipóxia, ativando mais de 40 genes envolvidos no fornecimento de oxigênio e na adaptação metabólica (eritropoietina, VEGF, enzimas glicolíticas etc.). Referências relacionadas: PMID:11292861, PMID:11566883, PMID:15465032
• Ela forma um heterodímero com ARNT e se liga a elementos de resposta à hipóxia (HREs) que contêm a sequência central 5'-TACGTG-3' nos promotores dos genes-alvo. A ativação transcricional requer o recrutamento de coativadores como CREBBP e EP300, sendo intensificada por NCOA1/NCOA2 e APEX1. Referências relacionadas: PMID:16543236, PMID:9887100, PMID:10594042, PMID:10202154
• Além de suas funções canônicas na hipóxia, a HIF1α participa da distribuição axonal de mitocôndrias em neurônios durante a hipóxia. Referências relacionadas: PMID:19528298
• Após a infecção por SARS-CoV-2, a HIF1α é necessária para a indução da glicólise e do estado pró-inflamatório em monócitos, aumentando a replicação viral e a expressão de citocinas (IL1B, TNF, IL6, interferons). Referências relacionadas: PMID:32697943
• A HIF1α é expressa ubiquamente, com níveis mais elevados nos rins e no coração; é comumente superexpressa em cânceres devido à hipóxia intratumoral ou a mutações oncogênicas, apresentando também expressão elevada em tumores hipofisários em comparação com o tecido hipofisário normal.
• A proteína se localiza no citoplasma, no núcleo e nos speckles nucleares, refletindo seu transporte dinâmico e sua atividade transcricional.
• As modificações pós-traducionais incluem hidroxilação, acetilação, fosforilação, S-nitrosilação e ubiquitinação, que regulam a estabilidade da proteína e a atividade transcricional.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético e espera-se que reconheça a proteína HIF1α total nas espécies humana e de camundongo. Confirme a reatividade no seu modelo experimental específico.
• Para Western blot, espere bandas de aproximadamente 83, 93 ou 96 kDa, dependendo da expressão das isoformas e das modificações pós-traducionais; utilize marcadores de massa molecular apropriados e controles positivos tratados em hipóxia para verificar a detecção.
• Na imunofluorescência/ICC, otimize a fixação e a permeabilização para preservar os sinais de localização citoplasmática e nuclear; recomenda-se induzir a estabilização da HIF1α por meio de miméticos de hipóxia ou incubação em baixa concentração de oxigênio antes da coloração.
• Para aplicações de ELISA, valide o par de anticorpos com HIF1α recombinante ou lisados celulares tratados em hipóxia para garantir uma faixa de detecção linear e sensibilidade adequadas.
• Como a HIF1α é rapidamente degradada em normóxia, pré-trate as células com inibidores do proteassoma (por exemplo, MG132) ou exponha-as à hipóxia para acumular proteína-alvo suficiente e obter uma detecção robusta em todas as aplicações.

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