Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-HIF1AN/FIH1 para WB e ELISA - Q9NWT6

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HIF1AN/FIH1

• HIF1AN (inibidor do fator 1-alfa induzível por hipóxia), também chamado de fator inibidor de HIF-1 (FIH-1), é uma asparagina hidroxilase que regula a resposta à hipóxia.
• Sob normóxia, hidroxila o HIF-1α na Asn-803 no domínio de transativação C-terminal, bloqueando o recrutamento dos coativadores p300/CBP e, assim, reprimindo a transcrição de genes induzíveis por hipóxia.
• Atua como um sensor direto de oxigênio; sua atividade de hidroxilase requer oxigênio molecular, ferro e 2-oxoglutarato, ligando a tensão de oxigênio celular à estabilidade e atividade do HIF-1α.
• Além do HIF-1α, o HIF1AN hidroxila resíduos de asparagina, aspartato e histidina em domínios de repetição anquirina (ARDs) de diversas proteínas, incluindo NFKB1, NOTCH1, ASB4 e TNKS2, modulando vias de sinalização além da hipóxia.
• Regula negativamente a sinalização Notch ao hidroxilar o NOTCH1, o que acelera a diferenciação miogênica; inversamente, a hidroxilação do ASB4 promove positivamente a diferenciação vascular.
• A distribuição subcelular inclui tanto o núcleo quanto o citoplasma, com acúmulo perinuclear, refletindo seus papéis na regulação transcricional e nas interações proteicas citoplasmáticas.
• Classificado como uma dioxigenase e oxidorredutase dependente de ferro; seu sítio ativo contém um centro de ferro mononuclear essencial para a catálise.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre virtualmente toda a proteína HIF1AN (resíduos 1–349), que abrange o domínio catalítico JmjC; espera-se que este projeto gere anticorpos reconhecendo múltiplos epítopos, auxiliando na detecção em ensaios desnaturantes e nativos.
• Para Western blot, é esperada uma banda em torno de 40–41 kDa; a inclusão de um lisado celular normóxico (ex: HeLa, HEK293) como controle positivo e uma amostra tratada com hipóxia para avaliar efeitos dependentes da hidroxilação do HIF-1α pode ser informativa.
• Ao realizar ELISA, considere revestir com HIF1AN recombinante ou um peptídeo de HIF-1α; um ELISA sanduíche emparelhado com um anticorpo de captura específico para um epítopo distinto pode aumentar a especificidade.
• A reatividade cruzada prevista com o HIF1AN de camundongo é suportada, mas o desempenho deve ser confirmado usando os extratos de tecido ou célula apropriados.
• As diluições ideais do anticorpo e as condições do ensaio devem ser determinadas empiricamente para cada sistema experimental.

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