Anticorpo monoclonal de coelho Anti-Histona H3.3 para WB, IHC-P, ELISA, ChIP, ChIP-seq - P84243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3.3

• Variante de histona H3 que substitui a H3 convencional nos nucleossomos de genes ativamente transcritos, sendo a forma predominante de H3 em células não divididas e se depositando independentemente da síntese de DNA
• Componente central dos nucleossomos, que envolve e compacta o DNA em cromatina para restringir a acessibilidade do molde; sendo, portanto, fundamental para a regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica
• Sujeito a uma série complexa de modificações pós-traducionais (acetilações, metilações, fosforilações, etc.) que constituem o código das histonas, regulando a dinâmica da cromatina e a expressão gênica
• Se localiza exclusivamente no núcleo e nos cromossomos, estando enriquecido nas regiões de deslocamento nucleossomal ao longo dos corpos gênicos, marcando a cromatina transcricionalmente ativa
• É codificado por dois genes, H3-3A (H3F3A) e H3-3B (H3F3B), que produzem produtos proteicos idênticos; distinto das variantes canônicas de H3 dependentes da replicação
• Associado a variantes patogênicas ligadas a deficiência intelectual e distúrbios do desenvolvimento, o que destaca seu papel epigenético crítico
• Altamente conservado entre vertebrados, com peso molecular previsto de aproximadamente 15.328 Da, embora frequentemente observado migrando em torno de 15–17 kDa em SDS-PAGE devido às modificações pós-traducionais

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 57–136 da Histona H3.3 humana, uma região envolvida nas interações com o nucleossomo; esse epítopo pode ser conformacionalmente sensível — recomenda-se testar em condições nativas e desnaturantes.
• Para WB, é esperada uma banda em torno de 15 kDa; valide no seu sistema de amostra específico e use controles de carregamento apropriados (por exemplo, H3 total ou proteinas housekeeping).
• Dada a reatividade cruzada reportada com Humano, Camundongo, Rato e uma ampla gama de outras espécies, é aconselhável realizar um teste piloto em modelos não padronizados.
• Em ChIP e ChIP-seq, otimize as condições de ligação cruzada e clivagem; o desempenho do anticorpo deve ser verificado com regiões de controle positivo (gene ativo) e negativo (locus silenciado).
• Para IHC-P, a recuperação de antígeno e a diluição do anticorpo devem ser determinadas empiricamente; é esperado um padrão de coloração nuclear.

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