Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-HLA-DPB1 para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P04440

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HLA-DPB1

• O HLA-DPB1 é a cadeia beta do antígeno de histocompatibilidade da classe II do HLA, uma glicoproteína transmembranar heterodimérica que desempenha um papel central na resposta imune adaptativa, apresentando antígenos peptídicos exógenos aos linfócitos T CD4+. Os peptídeos processados, geralmente com 10 a 30 resíduos, são carregados nas moléculas de MHC classe II dentro do sistema endossômico/lisossômico.
• A molécula funcional de MHC classe II é montada como um heterononâmero constituído por três heterodímeros alfa-beta associados a um trímero da cadeia invariante (CD74). Ao entrar na via endossômica, o CD74 é progressivamente clivado por proteases como a catepsina S (CTSS) e a catepsina L (CTSL), deixando um peptídeo residual CLIP no sulco de ligação, que é então trocado por peptídeos antigênicos de alta afinidade com a ajuda do editor de peptídeos HLA-DM.
• O processo de carregamento de antígeno ocorre em um compartimento endossômico/lisossômico tardio especializado, onde o microambiente ácido facilita tanto a proteólise dos antígenos internalizados quanto a reação de troca de peptídeos. Em linfócitos B, esse processo é ainda modulado pelo HLA-DO, que regula a atividade do HLA-DM.
• O HLA-DPB1 é um membro da família de genes da cadeia beta de MHC classe II e está mapeado no locus HLA-DP no cromossomo 6. Outros nomes incluem DPB1, HLA-DP, HLA-DPB e HLA-DP1B.
• Subcelularmente, o HLA-DPB1 trafega pelo retículo endoplasmático e aparelho de Golgi antes de chegar à superfície celular. Ele também é detectado em endossomos, lisossomos e na rede trans-Golgi, refletindo seu roteamento intracelular dinâmico durante o carregamento de peptídeos e expressão superficial.
• A proteína é classificada como uma glicoproteína transmembranar com peptídeo sinal, uma única hélice transmembranar e pontes dissulfeto. Ela sofre glicosilação N-ligada e é membro da superfamília das imunoglobulinas.
• As moléculas de MHC classe II, incluindo o HLA-DPB1, são expressas constitutivamente em células profissionais apresentadoras de antígeno, como células dendríticas, linfócitos B e macrófagos, mas também podem ser induzidas em outros tipos de células, incluindo células epiteliais intestinais, onde participam da imunidade mucosa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para gerar este anticorpo é um peptídeo sintético que abrange os resíduos 1–100 do HLA-DPB1 humano, correspondendo à região extracelular N-terminal. Esta região inclui o peptídeo sinal e parte do domínio β1, que está envolvido na ligação de peptídeos e formação do heterodímero de MHC II. Considere validar a acessibilidade do epítopo em condições nativas versus desnaturantes para sua aplicação específica.
• Para Western blotting, uma banda com migração de aproximadamente 29 kDa é esperada em condições redutoras. Devido à glicosilação e formação de complexos proteicos, espécies de maior peso molecular também podem ser observadas. Otimize as condições de bloqueio e lavagem para minimizar a ligação não específica em lisados complexos.
• Na imunofluorescência (IF-P) e imunohistoquímica (IHC-P), o anticorpo alvo um antígeno associado à membrana. A recuperação de antígeno com tampão de citrato mediada por calor (pH 6,0) costuma ser benéfica para secções fixadas em formalina e embebidas em parafina. Inclua controles de isotipo apropriados e controles positivos específicos de tecido, como amígdala ou linfonodo, onde o HLA-DPB1 é altamente expresso.
• Este anticorpo apresenta reatividade cruzada com camundongo e rato, indicando o reconhecimento de um epítopo conservado. Ao usar amostras de roedores, leve em consideração as possíveis diferenças na distribuição de tipos de células de MHC classe II e nos níveis de expressão. Experimentos piloto são recomendados para confirmar a adequabilidade ao seu sistema modelo.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado tanto como reagente de captura quanto de detecção contra HLA-DPB1 recombinante ou nativo. O pareamento com um anticorpo contra a cadeia alfa do HLA-DP pode ajudar a garantir a detecção do heterodímero intacto. Valide o ensaio na matriz de amostra relevante para descartar interferência de HLA solúvel ou moléculas de MHC classe I com reatividade cruzada.

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