Anticorpo Monoclonal Anti-HLA-DR para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01903

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Cadeia Alfa HLA-DR

• O HLA-DRA (também conhecido como HLA-DRA1) é um gene no cromossomo 6 que codifica a cadeia alfa das moléculas de MHC de classe II, com um peso molecular previsto de aproximadamente 29 kDa (forma madura em torno de 26 kDa após o clívagem do peptídeo sinal).
• A cadeia alfa codificada se monta com a cadeia beta HLA-DRB para formar heterodímeros HLA-DR funcionais que apresentam peptídeos antigênicos às células T CD4-positivas, direcionando as funções efetoras de auxiliares T e a ativação de macrófagos (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Referências relacionadas: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• O carregamento de antígenos peptídicos segue dois modos distintos de processamento: "ligar primeiro, cortar/aparar depois" para peptídeos derivados de patógenos e "cortar primeiro, ligar depois" para autopeptídeos, sendo o resíduo âncora N-terminal (tipicamente um aminoácido hidrofóbico grande) essencial para a ligação ao MHCII (PubMed:25413013, PubMed:8145819). Referências relacionadas: PMID:25413013 PMID:8145819
• No microambiente tumoral, o HLA-DR apresenta antígenos derivados de tumores capturados via fagocitose ou macropinocitose por APCs, facilitando respostas de células T CD4+ antitumorais (PubMed:31495665). Referências relacionadas: PMID:31495665
• O complexo HLA-DR cicla através de compartimentos endossômicos e lisossômicos, incluindo autolisossomos onde apresenta peptídeos de proteínas intracelulares derivadas da autofagia, um mecanismo crítico para a seleção de células T tímicas e tolerância central (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Referências relacionadas: PMID:17182262 PMID:23783831
• O HLA-DRA é expresso em nível proteico em células apresentadoras de antígenos profissionais — macrófagos, células dendríticas, células B — e células epiteliais tímicas, consistente com seu papel na imunidade adaptativa (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Referências relacionadas: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• O HLA-DRA é uma glicoproteína transmembrana que apresenta pontes dissulfeto e potencial ubiquitinação (ligação isopeptídeo), o que pode influenciar sua estabilidade e tráfego durante a formação da sinapse imunológica.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Design de imunógeno: O anticorpo foi produzido contra um peptídeo dentro dos aminoácidos 100-200 do HLA-DRA humano, que deve reconhecer o ectodomínio maduro; a reatividade cruzada com outras espécies não é garantida, mas pode ser testada se necessário.
• Western blot (WB): Use condições redutoras e execute um marcador de peso molecular; a banda detectada deve aparecer em ~29 kDa. Inclua um lisado de controle positivo de linhagens de células B humanas (ex: Raji) ou PBMCs.
• Imunofluorescência (IF/ICC): Permeabilize as células com 0,1% Triton X-100 para permitir o acesso do anticorpo aos epítopos intracelulares; o HLA-DR localiza-se principalmente na superfície celular e compartimentos endocíticos. Use APCs humanas ou linhagens de células expressando HLA-DR como controles positivos.
• Imunohistoquímica parafina (IHC-P): Realize a recuperação de antígeno induzida por calor em tampão citrato (pH 6,0) antes da incubação; valide a coloração em tecidos linfoides humanos (tonsila, baço) conhecidos por expressar MHCII.
• ELISA: O anticorpo pode ser usado em formato de ELISA sanduíche com um anticorpo de detecção pareado; valide usando proteína recombinante HLA-DR ou placas revestidas com peptídeo.

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