Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-HLA-DR para WB, IF/ICC, ELISA - P01903

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do HLA-DR

• O gene HLA-DRA codifica a cadeia alfa do antígeno de histocompatibilidade HLA classe II DR, que se emparelha com a cadeia beta (HLA-DRB) para formar a molécula MHC classe II funcional em células apresentadoras de antígeno.
• O complexo MHCII apresenta peptídeos antigênicos extracelulares (tipicamente 10-30 aminoácidos) a células T CD4-positivas, guiando as funções efetoras dos linfócitos T auxiliares que impulsionam a imunidade mediada por anticorpos e a ativação de macrófagos.
  Referências relacionadas:
  PMID:15265931, PMID:15322540, PMID:17334368
• No microambiente tumoral, o HLA-DR apresenta peptídeos derivados de células tumorais apoptóticas fagocitadas ou proteínas tumorais secretadas macropinocitadas, ligando-o à vigilância imune do câncer.
  Referências relacionadas:
  PMID:31495665
• O HLA-DR também apresenta peptídeos de autolisossomos após macroautofagia, um processo crítico para a seleção de células T no timo e a tolerância imune central.
  Referências relacionadas:
  PMID:17182262, PMID:23783831
• A seleção do epítopo imunodominante pelo MHCII segue duas vias de processamento distintas: "ligar primeiro, cortar/aparar depois" para peptídeos derivados de patógenos e "cortar primeiro, ligar depois" para peptídeos próprios.
  Referências relacionadas:
  PMID:25413013
• Um grande resíduo hidrofóbico âncora na posição 1 do peptídeo é essencial para a interação de alta afinidade com o sulco de ligação do MHCII.
  Referências relacionadas:
  PMID:8145819
• Subcelularmente, o HLA-DR reside na membrana celular, mas também trafega pelo retículo endoplasmático e compartimentos endossomais/lisossomais, incluindo endossomos iniciais e tardios, lisossomos e autolisossomos.
• É predominantemente expresso em células apresentadoras de antígeno profissionais—macrófagos, células dendríticas e células B—bem como em células epiteliais tímicas, onde media a educação das células T.
  Referências relacionadas:
  PMID:15322540, PMID:23783831, PMID:31495665
• Características estruturais-chave incluem um peptídeo sinal, uma única hélice transmembrana, ligações dissulfeto e glicosilação N-ligada; também está sujeito à ubiquitinação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno recombinante abrange os aminoácidos 26–126 do HLA-DRA humano, cobrindo o domínio extracelular N-terminal; esta região é menos polimórfica do que a cadeia beta e pode conferir reatividade ampla contra alelos HLA-DR, mas a validação no sistema celular alvo é recomendada.
• Para western blotting, espera-se uma banda em aproximadamente 29 kDa em condições redutoras; considere usar linhagens celulares derivadas de CPA humanas (por exemplo, Raji, THP-1 diferenciada) ou tecidos com alta expressão de MHCII como controles positivos.
• Em imunofluorescência/ICC, os protocolos de fixação e permeabilização devem ser otimizados, pois o alvo está localizado na membrana e também pode ser detectado em compartimentos intracelulares (endossomos/lisossomos). A co-coloração com um marcador de membrana é aconselhável.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser adequado como reagente de captura ou detecção para HLA-DR solúvel ou complexos peptídeo-MHC; as condições do ensaio devem ser tituladas para estabelecer linearidade e especificidade.
• Observe que a reatividade cruzada é relatada apenas para humano; a reatividade cruzada com outras espécies não é garantida. Ao adaptar para amostras de primatas não humanos, a homologia de sequência deve ser verificada.

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