Anticorpo monoclonal de coelho anti-HMGCS2 para WB, IF, IHC-P, ELISA - P54868

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da HMGCS2

• A HMGCS2 catalisa a primeira etapa irreversível da cetogênese, condensando acetil-CoA e acetoacetil-CoA para formar 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA). Essa HMG-CoA também pode ser convertida em mevalonato pela HMG-CoA redutase, conectando as vias cetogênica e colesterogênica.
• A enzima está localizada na matriz mitocondrial, em conformidade com seu papel na produção hepática de corpos cetônicos.
• A HMGCS2 é predominantemente expressa no fígado, com análises quantitativas mostrando níveis mais de 200 vezes superiores aos de outros tecidos. Baixa expressão é detectada no cólon, rim, testículo e pâncreas, e muito baixa no coração e no músculo esquelético; ela está ausente no cérebro (PubMed:16940161, PubMed:21952825, PubMed:7893153). É importante notar que os dados de transcritos indicam a maior expressão no coração e no músculo esquelético, sugerindo regulação pós-transcricional ou diferenças entre isoformas. Referências relacionadas: PMID:16940161 PMID:21952825 PMID:7893153
• O splicing alternativo produz múltiplas isoformas que, juntamente com a acetilação e a fosforilação pós-traducionais, contribuem para as bandas proteicas observadas em 50, 52 e 56 kDa.
• Mutações na HMGCS2 estão associadas a distúrbios metabólicos (variante relacionada a doença), ressaltando sua importância clínica.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno foi desenvolvido utilizando um peptídeo da região C-terminal (aa 400-500) da HMGCS2 humana, uma estratégia que pode aumentar a especificidade. Ao adaptar essa abordagem, alinhe as sequências entre as espécies caso deseje obter reatividade cruzada.
• Na análise por Western blot, observe múltiplas bandas entre 50 e 56 kDa devido às isoformas e modificações; inclua marcadores de peso molecular e controles positivos apropriados (por exemplo, lisado de fígado).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), pode ser necessária a recuperação antigênica; preveja uma marcação mitocondrial. A imunofluorescência (IF/ICC, IF-P) deve revelar um padrão mitocondrial pontilhado.
• O anticorpo foi testado em amostras humanas, de camundongo e de rato, tornando-o adequado para estudos comparativos em modelos de roedores de cetogênese ou metabolismo hepático.
• As aplicações em ELISA podem exigir a otimização das condições de revestimento e dos títulos do anticorpo para o analito específico.

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