Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-hnRNP K para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P61978

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do hnRNP K

• O hnRNP K é uma principal proteína de ligação ao pré-mRNA com alta afinidade por sequências poli(C), desempenhando um papel central no metabolismo de hnRNA, splicing e processamento de mRNA.
• É um mediador crítico da resposta ao dano no DNA do p53/TP53, funcionando como um coativador transcricional (quando sumoilado) para genes como o p21/CDKN1A e um repressor através de interações com RNAs não codificantes, como o lincRNA-p21, regulando assim a apoptose e a parada do ciclo celular.
• Como parte de um complexo ribonucleoproteico contendo ZNF827, HNRNPL e circZNF827, o hnRNP K regula negativamente a transcrição de genes envolvidos na diferenciação neuronal (PubMed:33174841). Referências relacionadas: PMID:33174841
• A proteína se localiza dinamicamente em múltiplos compartimentos subcelulares: núcleo, nucleoplasma, citoplasma e podossomos, consistente com seus papéis no processamento de RNA, sinalização e adesão celular.
• O hnRNP K sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, metilação, sumoilação e glicosilação, que modulam sua atividade, localização e redes de interação.
• Possui atividade de ligação ao DNA de fita simples e está implicado em interações hospedeiro-vírus, destacando suas contribuições multifacetadas para a homeostase celular e patogênese.
• O splicing alternativo do pré-mRNA HNRNPK gera múltiplas isoformas, embora suas distinções funcionais não sejam totalmente caracterizadas aqui.
• Palavras-chave do UniProt incluem: processamento de mRNA, spliceossomo, regulação da transcrição, ativador, repressor e deficiência intelectual, sublinhando seus amplos papéis regulatórios na expressão gênica e doença.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 1-100 do hnRNP K humano; o alinhamento de sequência com ortólogos de camundongo e rato mostra homologia significativa, apoiando a reatividade cruzada relatada. Valide a especificidade na sua espécie alvo e tecido.
• No Western blot (WB), espera-se uma banda predominante em torno de 49-51 kDa; no entanto, devido a extensas modificações pós-traducionais, múltiplas bandas ou ligeiras mudanças de massa podem ser observadas. Use marcadores de peso molecular apropriados e controles positivos (por exemplo, lisados celulares totais de HeLa ou HEK293).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), analise os padrões de localização subcelular: espere coloração nuclear e citoplasmática. Otimize a recuperação de antígeno (por exemplo, tampão citrato pH 6,0) e as etapas de permeabilização. Considere o uso de marcadores de podossomos para estudos de co-localização.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode servir como reagente de captura ou detecção; no entanto, as condições do ensaio (tampão de revestimento, bloqueio, etapas de lavagem) e o emparelhamento de anticorpos devem ser determinados empiricamente.
• Dado o envolvimento do hnRNP K na sinalização p53, avaliar as mudanças de expressão após a indução de dano no DNA (por exemplo, por doxorrubicina ou tratamento com UV) pode servir como uma estratégia de validação funcional.

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