Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-HSP47/SERPINH1 para WB, IF/ICC, ELISA - P50454

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da HSP47/SERPINH1

• A HSP47, também conhecida como Serpin H1, é uma proteína de choque térmico de 47 kDa (coligina) pertencente à superfamília das serpinas e é codificada pelo gene SERPINH1 em humanos.
• Ela funciona como uma chaperona molecular específica do colágeno no retículo endoplasmático, sendo essencial para a biossíntese, o dobramento e a trimerização adequados do colágeno.
• A proteína está localizada no lúmen do retículo endoplasmático, onde se associa temporariamente a intermediários do procolágeno para evitar a agregação prematura.
• Os nomes alternativos incluem CBP1, CBP2, gp46, AsTP3, PIG14, RA-A47 e SERPINH2, refletindo sua descoberta em diversos contextos celulares e patológicos.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e N-glicosilação, que podem regular sua atividade e estabilidade.
• A expressão de HSP47 é aumentada em condições de estresse (por exemplo, choque térmico) e é essencial para a homeostase do colágeno nos tecidos conjuntivos; mutações no SERPINH1 estão associadas à osteogênese imperfeita.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 139–418 da HSP47/SERPINH1 humana (NP_001226.2), expressa como uma proteína de fusão recombinante. Essa região abrange uma parte substancial do domínio serpin, provavelmente apresentando múltiplos epítopos para a geração de anticorpos policlonais.
• No Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 46 kDa sob condições redutoras e desnaturantes. Valide a detecção em linhagens celulares ou tecidos relevantes que expressem colágeno (por exemplo, fibroblastos e osteoblastos). Utilize controles de carregamento apropriados.
• Para imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), é necessária a permeabilização (por exemplo, com Triton X-100 ou saponina) para acessar o lúmen do RE. Espera-se um padrão de marcação reticular típico das proteínas do RE. Realize uma coloração dupla com um marcador do RE para confirmação.
• Na ELISA, a especificidade e o título do anticorpo devem ser otimizados utilizando HSP47 recombinante ou lisados celulares. Como se trata de um reagente policlonal, a consistência entre lotes deve ser verificada para ensaios quantitativos.
• A reatividade cruzada com a HSP47 de camundongo foi confirmada; para outras espécies, a homologia da sequência deve ser verificada antes do uso.

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