Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-HSPA4 para WB, IHC-P, ELISA - P34932

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da HSPA4

• HSPA4 (Proteína de choque térmico de 70 kDa 4) também é conhecida como HSP70RY, APG-2 e H membro 2 da família de proteínas de choque térmico. É codificada pelo gene HSPA4 (também chamado de APG2 ou HSPH2) no cromossomo 5 humano.
• Como membro da família Hsp70, HSPA4 possui um domínio ATPase altamente conservado e um domínio de ligação a substrato, permitindo que ela atue como uma chaperona molecular dependente de ATP envolvida no dobramento de proteínas e na resposta ao estresse.
• A proteína contém motivos de ligação a nucleotídeos, consistentes com sua capacidade de ligação a ATP, que é essencial para seu ciclo de chaperona e interação com co-chaperonas.
• Estudos de localização subcelular indicam que HSPA4 é predominantemente citoplasmática, onde exerce suas funções de chaperona tanto em condições normais quanto de estresse.
• As modificações pós-traducionais da HSPA4 incluem acetilação, fosforilação e metilação, que podem regular sua atividade, estabilidade ou interações proteicas.
• O splicing alternativo do transcrito de HSPA4 dá origem a múltiplas isoformas, expandindo potencialmente sua diversidade funcional em diferentes contextos celulares.
• HSPA4 é classificada como uma proteína de resposta ao estresse, e sua expressão provavelmente é upregulada sob condições de estresse celular para evitar a agregação de proteínas e manter a proteostase.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para este anticorpo é um peptídeo sintético que compreende os aminoácidos 700–800 da HSPA4 humana (P34932). Esta região reside no domínio C-terminal, que é menos conservado entre os membros da família Hsp70 e pode conferir especificidade ao alvo.
• Para aplicações de Western blot (WB), considere utilizar um protocolo padrão de SDS-PAGE desnaturante com uma escada de proteínas que cubra a faixa de 94 kDa. Otimize as condições de transferência para proteínas de alto peso molecular e valide a detecção com controles positivos adequados (por exemplo, lisados de HeLa ou HEK293).
• Na imunohistoquímica (IHC-P), os métodos de recuperação de antígeno (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor em pH 6 ou 9) e as diluições do anticorpo devem ser otimizadas empiricamente para cada tipo de tecido para reduzir o fundo e obter coloração específica.
• Para ELISA, certifique-se de que o par de anticorpos (antígeno de revestimento e anticorpo de detecção) foi testado completamente e realize titulações em tabuleiro de damas para estabelecer as concentrações de trabalho ideais.
• Como este anticorpo é produzido contra um imunógeno peptídico, ele pode reconhecer epítopos lineares expostos sob condições desnaturantes (por exemplo, WB), mas pode necessitar de validação em ensaios conformacionais nativos.

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