Anticorpo Monoclonal Anti-CD59 Humano para Citometria de Fluxo - P13987

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD59

• O CD59, também conhecido como protectina, proteína inibidora do MAC (MAC-IP), fator de restrição homólogo de 20 kDa (HRF-20) e antígeno 1F5, é uma glicoproteína de superfície celular ancorada por GPI que atua como um inibidor essencial do complexo de ataque à membrana (MAC) do complemento.
• Ele se liga ao componente C8 (C8A e C8B) do MAC em formação, criando uma folha beta intermolecular que impede a incorporação de várias moléculas de C9, bloqueando assim a formação do poro osmótico e protegendo as células humanas da lise mediada pelo complemento (PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260). Referências relacionadas: PMID:11882685, PMID:1698710, PMID:2475111, PMID:36797260
• Uma forma solúvel do CD59, encontrada na urina, mantém a atividade de ligação ao complemento, mas apresenta capacidade significativamente reduzida de inibir a montagem do MAC nas membranas celulares.
• A proteína está localizada na membrana celular por meio de uma âncora GPI; uma forma secretada também foi detectada.
• O CD59 sofre splicing alternativo e modificações pós-traducionais, incluindo formação de ligações dissulfeto, glicação e glicosilação ligada a N; mutações no CD59 estão associadas à anemia hemolítica hereditária.
• A massa molecular prevista do CD59 é de 14177 Da, consistente com sua migração observada a aproximadamente 14–18 kDa em SDS-PAGE.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio extracelular (aa 26–101) do CD59 humano, que inclui os principais sítios funcionais de ligação ao MAC; esse design pode favorecer o reconhecimento de conformações nativas e corretamente dobradas.
• Para citometria de fluxo, considere o uso de células vivas e não fixadas para preservar o CD59 de superfície celular ancorado por GPI; recomenda-se o bloqueio dos receptores Fc para minimizar a ligação inespecífica.
• Titule o anticorpo de acordo com suas condições experimentais específicas para determinar a diluição ideal; proteja o conjugado da luz e evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para manter a estabilidade do fluoróforo.
• Valide a especificidade usando células positivas para CD59 (por exemplo, leucócitos) e controles knockout ou deficientes em CD59; a detecção complementar com um marcador de âncora GPI anti-GPI pode confirmar a localização na membrana.

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