Anticorpo Monoclonal Anti-FAP Humano para FC - Q12884

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da FAP

• A endopeptidase prolil FAP (também conhecida como seprase, FAPalpha, DPPIV, SIMP) é uma glicoproteína de superfície celular e protease de serina que existe como homodímero de ~170 kDa formado por monômeros de ~88 kDa.
• A protease apresenta atividade de endopeptidase clivante pós-prolina, com marcada preferência por motivos Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala, tendo como alvo substratos como a alfa-2-antiplasmina (SERPINF2) e SPRY2. Referências relacionadas: PMID:14751930, PMID:16223769, PMID:16410248
• Ela também possui atividade de dipeptidil peptidase, hidrolisando ligações prolícas dois resíduos a partir do N-terminal de substratos sintéticos (por exemplo, Ala-Pro, Ile-Pro, Gly-Pro, Arg-Pro, Pro-Pro) e processa neuropeptídeos naturais incluindo NPY, PYY, substância P e BNP. Referências relacionadas: PMID:10347120, PMID:10593948, PMID:16175601, PMID:21314817
• FAP degrada gelatina e colágeno tipo I desnaturado pelo calor, mas não cliva colágenos nativos nem vários outros componentes da MEC como fibronectina e laminina. Referências relacionadas: PMID:10347120, PMID:10455171, PMID:12376466
• Na membrana plasmática, FAP se associa com DPP4, PLAUR ou integrinas para mediar a proteólise da MEC pericelular, promovendo assim a adesão celular, migração e invasão.
• FAP está ancorada na superfície celular e enriquecida em protrusões de membrana (lamelipódios, invadopódios, ruffles); também é encontrada na forma secretada e no citoplasma.
• A proteína é expressa em fibroblastos estromais ativados de vários tecidos, incluindo feridas em cicatrização, fígado fibrótico e cânceres epiteliais, além de células de glioma e melanoma. Está ausente no fígado normal.
• Duas isoformas (isoforma 1 e isoforma 2) são produzidas por splicing alternativo, ambas detectadas em linhagens celulares de melanoma, carcinoma e fibroblastos.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para citometria de fluxo, titule o anticorpo para determinar a concentração de coloração ideal e inclua sempre controles de isotipo apropriados.
• É conhecido que FAP sofre clivagem proteolítica e glicosilação, o que pode resultar em múltiplas bandas (por exemplo, ~27 kDa e ~87 kDa) na imunodetecção. Valide as condições de detecção usando um controle positivo relevante (por exemplo, linhagens celulares que expressam FAP).
• Como FAP é uma proteína transmembrana, protocolos de coloração de células vivas podem ser considerados; evite buffers de permeabilização se o alvo são epitopos extracelulares.
• Confirme que as configurações de laser e filtro do citômetro de fluxo são compatíveis com o (máximos de excitação/emissão ~590/617 nm).

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