Anticorpo Policlonal Anti-Parkin Humano para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O60260

Especificações e Parâmetros Fundamentais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Parkin

• A Parkin, codificada pelo gene PRKN (PARK2), é uma ligase E3 de ubiquitina-proteína que funciona no interior de um complexo multiproteico para catalisar a ligação covalente de grupos de ubiquitina às proteínas substrato, mediando processos celulares que incluem a degradação proteica, o controlo de qualidade mitocondrial e a sobrevivência celular. Referências relacionadas: PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533

• A Parkin ubiquitina uma ampla variedade de substratos, incluindo SYT11, VDAC1, BCL2, CCNE1, GPR37, RHOT1/MIRO1, MFN1, MFN2, SNCAIP, TOMM20 e ZNF746; pode mediar tanto a monoubiquitinação como várias ligações de cadeias de poliubiquitina (Lys-6, Lys-11, Lys-48, Lys-63), dependendo do contexto celular. Referências relacionadas: PMID:29311685, PMID:32047033, PMID:10888878, PMID:10973942, PMID:11431533, PMID:19229105, PMID:20889974, PMID:25474007

• Uma função essencial da Parkin é manter a integridade mitocondrial; após danos mitocondriais, a fosforilação mediada por PINK1 recruta a Parkin para a membrana mitocondrial externa, onde ubiquitina proteínas para promover a mitofagia e a fissão mitocondrial, eliminando assim organelos disfuncionais. Referências relacionadas: PMID:11439185, PMID:18957282, PMID:19029340, PMID:24660806, PMID:24784582, PMID:25474007

• A Parkin ubiquitina diretamente proteínas da membrana mitocondrial externa, como TOMM20, MFN1, MFN2, MIRO1 e USP30, desencadeando a mitofagia e impedindo a fusão de mitocôndrias danificadas com redes saudáveis; também regula a motilidade mitocondrial através da degradação de MIRO1. Referências relacionadas: PMID:19029340, PMID:19966284, PMID:21753002, PMID:22396657, PMID:23620051

• Para além da mitofagia, a Parkin protege as células da apoptose através da monoubiquitinação de BCL2 para promover a autofagia, limitando o influxo de cálcio mitocondrial e reprimindo transcricionalmente o p53; pode também funcionar como supressor tumoral. Referências relacionadas: PMID:20889974, PMID:19801972, PMID:32047033, PMID:12719539, PMID:11439185

• Mutações homozigóticas ou heterozigóticas compostas no PRKN constituem uma causa importante da doença de Parkinson juvenil autossómica recessiva (PDJ); a Parkin é altamente expressa no cérebro, especialmente na substância negra, e os seus níveis estão reduzidos no cérebro de doentes com PARK2 e em muitos tumores. Referências relacionadas: PMID:9560156, PMID:12719539, PMID:14614460, PMID:19501131

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunogénio abrange os 387 aminoácidos N-terminais da Parkin humana, sugerindo que o anticorpo pode reconhecer múltiplos epítopos e detetar tanto a Parkin endógena como a proteína recombinante.
• Para Western blot, é esperada uma banda de aproximadamente 52 kDa; no entanto, podem surgir bandas secundárias devido a modificações pós-traducionais ou isoformas, sendo recomendada a inclusão de controlos adequados (por exemplo, lisados com knockout de Parkin).
• Dada a reatividade cruzada com ratinho e rato, este anticorpo pode ser adequado para estudar a Parkin em modelos de roedores da doença de Parkinson; considere validar o anticorpo no seu sistema específico de tecidos ou células utilizando IHC-P ou IF/ICC, com co-coloração para marcadores mitocondriais.
• As diluições e condições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente para cada aplicação; são frequentemente utilizadas diluições iniciais de 1:500-1:2000 para WB, 1:50-1:200 para IHC-P e 1:50-1:200 para IF/ICC no caso de anticorpos policlonais.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como anticorpo de captura ou de deteção quando emparelhado com um anticorpo secundário adequado; o desempenho pode variar consoante a apresentação do antigénio.

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