Anticorpo Monoclonal Anti-Ikaros para WB, IF/ICC, ELISA, ChIP, CUT&Tag - Q13422

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Ikaros

• O Ikaros (IKZF1) é um fator de transcrição de dedo de zinco de ligação ao DNA que pertence à família Ikaros, também conhecido como fator de transcrição linfoide LyF-1. Múltiplas isoformas são produzidas por splicing alternativo, algumas atuando como reguladores negativos dominantes (PubMed:17135265, PubMed:17934067). Referências relacionadas: PMID:17135265 PMID:17934067
• Atua como um regulador chave da diferenciação de células hematopoiéticas, desempenhando um papel crítico no desenvolvimento de linfócitos, particularmente células B e T. Liga-se e ativa o intensificador do gene CD3-delta e reprime o gene TDT durante a diferenciação de timócitos (PubMed:17934067). Referências relacionadas: PMID:17934067
• O Ikaros modula a estrutura da cromatina recrutando complexos de remodelação da cromatina, como NuRD e BAF (SWI/SNF), para locais alvo, incluindo o loco da beta-globina em eritrócitos adultos, formando o complexo PYR.
• Liga-se ao DNA satélite gama, contribuindo para a organização da heterocromatina pericentromérica (PubMed:17135265, PubMed:19141594). Referências relacionadas: PMID:17135265 PMID:19141594
• A localização subcelular é principalmente nuclear, consistente com o seu papel na regulação transcricional, mas a detecção citoplasmática também foi relatada.
• Expresso abundantemente em tecidos linfoides, como timo, baço, leucócitos de sangue periférico e linfonodos, com níveis mais baixos na medula óssea e no intestino delgado.
• A proteína sofre fosforilação pós-traducional e conjugação tipo ubiquitina, que podem regular a sua atividade e estabilidade. Contém múltiplos dedos de zinco do tipo C2H2 para ligação ao DNA e interações proteína-proteína.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 250-350 do Ikaros humano, uma região fora dos domínios de dedo de zinco. Isso pode permitir a detecção de múltiplas isoformas.
• Para western blotting (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 58 kDa, mas bandas específicas de isoformas podem aparecer em tamanhos diferentes. Valide os padrões de banda em lisados celulares relevantes (por exemplo, Jurkat, timo).
• Para ensaios de imunoprecipitação de cromatina (ChIP) e CUT&Tag, devido à associação do Ikaros com a cromatina, é aconselhável otimizar as condições de fixação e validar o enriquecimento em genes alvo conhecidos (por exemplo, CD3-delta, satélite gama) em células hematopoiéticas.
• Em imunofluorescência (IF) e imunocitoquímica (ICC), espere principalmente coloração nuclear. Recomenda-se a coloração simultânea com um marcador nuclear.
• O anticorpo mostra reatividade cruzada com amostras de camundongo, o que pode ser vantajoso para estudos de tradução; no entanto, sugere-se o alinhamento da sequência da região do imunógeno antes do uso em modelos de camundongo.

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