Anti-IKKβ pAb de coelho para WB, IF/ICC, ELISA - O14920

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IKKβ

• IKKβ é uma serina/treonina-proteína quinase que atua como subunidade catalítica crítica do complexo IKK canônico, essencial para a ativação da sinalização de NF-κB downstream de citocinas pró-inflamatórias, receptores de reconhecimento de padrões e estresse genotóxico. Referências relacionadas: PMID:9346484
• Ele fosforila as proteínas inibidoras de κB (IκB) em resíduos de serina conservados, desencadeando sua poliubiquitinação ligada a K48 e degradação proteassômica; isso libera dímeros de NF-κB (ex.: p65/p50) para translocação nuclear e transcrição de genes imunes, de sobrevivência e inflamatórios. Referências relacionadas: PMID:20434986, PMID:20797629, PMID:21138416
• Além dos substratos IκB, o IKKβ fosforila múltiplos parceiros de sinalização — incluindo NEMO/IKBKG, RELA e as quinases relacionadas a IKK TBK1 e IKBKE — para fornecer tanto ativação feedforward quanto feedback regulatório negativo dentro da rede de NF-κB. Referências relacionadas: PMID:11297557, PMID:14673179, PMID:20410276
• A quinase também atua sobre substratos não canônicos como FOXO3 (mediando a inativação induzida por TNF desse fator de transcrição pró-apoptótico) e STAT1 (fosforilado em Thr-749 para promover a estabilização de IL-6 mediada por ARID5A e a ativação de IL-12B), integrando assim o NF-κB às vias apoptóticas e imunes inatas. Referências relacionadas: PMID:15084260, PMID:32209697, PMID:38621137
• Estudos de fracionamento subcelular e imunofluorescência localizam o IKKβ predominantemente no citoplasma, com translocação dependente de sinal para o núcleo e recrutamento para rafts de membrana após certos estímulos.
• O perfil de expressão tecidual revela níveis elevados de IKKβ em coração, placenta, músculo esquelético, rim, pâncreas, baço, timo, próstata, testículo e sangue periférico, o que é consistente com seu papel no controle inflamatório ubiquitário.
• Modificações pós-traducionais — incluindo acetilação, hidroxilação, S-nitrosilação e conjugação isopeptídica (ubiquitina-like) — ajustam a estabilidade, a atividade e a interação do IKKβ com parceiros regulatórios.
• Clinicamente, mutações de perda de função em IKBKB estão associadas à imunodeficiência combinada grave (SCID) e outras síndromes de desregulação imunológica, destacando seu papel não redundante na homeostase imunológica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os resíduos 400–669 na metade C-terminal do IKKβ humano. Essa região está distante do domínio quinase e pode detectar múltiplas variantes de splicing ou fragmentos proteolíticos, o que corresponde à faixa de 29–87 kDa relatada no Western blot. Recomenda-se o uso de coquetéis de inibidores de protease durante a preparação da amostra para preservar as espécies de comprimento total.
• Para Western blotting, valide a especificidade por knockdown de siRNA ou knockout de CRISPR-Cas9 no sistema celular relevante e compare com o peso molecular previsto de comprimento total de ~87 kDa. Para IF/ICC, espera-se coloração tanto citoplasmática quanto nuclear indutível; faça a co-coloração com um marcador nuclear e verifique com controles negativos apropriados.
• Em aplicações de ELISA, use a proteína recombinante de IKKβ ou o peptídeo imunógeno como controle de captura positivo, e titule o anticorpo usando um protocolo indireto padrão para otimizar a relação sinal-ruído.

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