Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-IL1β para WB, IF/ICC, ELISA - P10749

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IL1β

• A interleucina-1 beta (IL1β) é uma potente citocina pró-inflamatória pertencente à família da interleucina-1, codificada pelo gene Il1b em camundongos (ID do Gene: 16176, UniProt P10749). A proteína é sintetizada como um precursor de 31 kDa que é clivado para gerar uma forma madura secretada.
• O IL1β foi inicialmente identificado como o principal pirógeno endógeno, capaz de induzir febre. Estimula a síntese de prostaglandinas, promove o influxo e ativação de neutrófilos e regula as funções de células T e B, impulsionando respostas imunes adaptativas.
• O IL1β desempenha um papel central na cascata inflamatória: sinergiza com IL12 para induzir a produção de interferon-gama (IFNG) por células Th1 e promove a diferenciação de Th17. Também facilita a angiogênese ao induzir a produção de VEGF em combinação com TNF e IL6.
• A forma madura do IL1β é liberada extracelularmente através de uma via de secreção não clássica. Após a ativação do inflamassomo e piroptose, o IL1β maduro sai passivamente através dos poros de gasdermina-D (GSDMD) na membrana plasmática, ligando a detecção imune inata à inflamação.
• A nível subcelular, o IL1β é encontrado no citosol, lisossomos e é ativamente secretado. Também está associado a exossomos extracelulares, indicando múltiplas rotas de secreção (UniProt: LOCALIZAÇÃO SUBCELULAR).
• A expressão do IL1β é estritamente regulada e predominantemente observada em macrófagos ativados a nível de proteína, consistente com o seu papel na imunidade inata (UniProt: ESPECIFICIDADE DE TECIDO).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 118-269 do precursor do IL1β de camundongo (NP_032387.1), cobrindo a região do IL1β maduro. O anticorpo pode reconhecer tanto o precursor de ~31 kDa quanto a forma madura de ~17 kDa, dependendo da amostra e do estado de ativação. É aconselhável executar marcadores de peso molecular apropriados e controles positivos (por exemplo, lisados de macrófagos estimulados com LPS) para identificar as bandas específicas.
• Para Western blot (WB), use um SDS-PAGE redutor e protocolos de transferência padrão. Uma banda em torno de 31 kDa é esperada para o precursor de comprimento total, enquanto uma banda em ~17 kDa pode aparecer em amostras secretadas ou clivadas.
• Na imunofluorescência/ICC (IF/ICC), inclua controles de estimulação (por exemplo, LPS ± ATP) para induzir a expressão e secreção de IL1β, pois os níveis basais podem ser baixos. A coloração simultânea com marcadores de organelas pode ajudar a visualizar sua localização citosólica ou secretada.
• Para ELISA, considere emparelhar este anticorpo com um anticorpo de detecção adequado que reconheça um epítopo distinto se for usado como reagente de captura. Valide o ensaio com padrões de IL1β de camundongo recombinante e amostras biológicas.
• A reatividade cruzada é confirmada para camundongo; realize uma validação específica da espécie se usado em outras espécies. A IgG endógena de camundongo pode produzir fundo em tecidos de camundongo; o uso de anticorpos secundários anti-coelho e bloqueio apropriado pode mitigar isso.

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