Anticorpo Policlonais Anti-IRAK4 para WB, IF/ICC, ELISA - Q9NWZ3

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRAK4

• IRAK4 (Interleukin-1 receptor-associated kinase 4) é uma serina/treonina quinase essencial para a sinalização da imunidade inata, codificada pelo gene IRAK4 em humanos. Também é conhecido como antígeno de carcinoma renal NY-REN-64.
• Após a ativação dos receptores Toll-like (TLRs) ou do receptor de interleucina-1 (IL-1R), o IRAK4 é recrutado por MYD88 para formar o complexo Myddossomo com IRAK2, iniciando a transdução de sinal a jusante. Referências relacionadas: PMID:17878374
• O IRAK4 fosforila o IRAK1, que então sofre autofosforilação e forma um complexo com TRAF6 e TAK1; ele também fosforila as proteínas Pellino (PELI1, PELI2, PELI3) para promover a poliubiquitinação do IRAK1, levando finalmente à translocação do NF-κB para o núcleo e à ativação da expressão de genes inflamatórios.
• Alternativamente, o IRAK4 fosforila o TIRAP para promover sua ubiquitinação e degradação, e fosforila o NCF1 para regular a ativação da NADPH oxidase após a estimulação com LPS, sugerindo um papel nas respostas microbicidas.
• Subcelularmente, o IRAK4 localiza-se principalmente no citoplasma, o que é consistente com sua função na montagem do sinalossoma em sítios próximos à membrana.
• As palavras-chave associadas ao IRAK4 incluem quinase, ligação a nucleotídeos, magnésio, acetilação, splicing alternativo e variantes de doenças; mutações no IRAK4 estão ligadas a distúrbios de imunodeficiência primária, como IPD1 e IMD67, caracterizados por maior suscetibilidade a infecções bacterianas piogênicas.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O anticorpo foi produzido contra um fragmento N-terminal (aa 1-200) que cobre o domínio de morte do IRAK4 humano; ele pode reconhecer tanto as isoformas de comprimento completo quanto as truncadas na extremidade N, se estiverem presentes.
• Para Western blotting, é esperada uma banda de aproximadamente 52 kDa em lisados de linhagens celulares humanas, de camundongo ou rato; o peso molecular pode variar ligeiramente devido à fosforilação ou às condições do gel.
• Em imunofluorescência/ICC, deve ser observada a localização citoplasmática; utilize protocolos adequados de fixação e permeabilização.
• Para ELISA, considere a titulação do anticorpo e otimize a concentração do antígeno de revestimento para obter a melhor relação sinal-ruído.
• A reatividade cruzada com IRAK4 de camundongo e rato é indicada pelo fornecedor; a validação em sistemas de amostras específicos é recomendada antes de estudos em larga escala.
• Para estudar a ativação do IRAK4, estimule as células com IL-1β ou ligantes de TLR (por exemplo, LPS) e avalie o status de fosforilação ou a formação de complexos usando co-imunoprecipitação.

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