Anticorpo Monoclonal Anti-IRE1 para WB, ELISA - O75460

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da IRE1

• IRE1 (também conhecida como IRE1P, IRE1a ou hIRE1p) é uma serina/treonina-proteína quinase e endorribonuclease de ~110 kDa codificada pelo gene ERN1 em humanos.
• IRE1 serve como um sensor crítico na resposta a proteínas não dobradas (UPR) do retículo endoplasmático (RE). Em condições basais, seu domínio luminal é mantido inativo pela ligação à HSPA5/BiP. O acúmulo de proteínas mal dobradas desencadeia a liberação, homodimerização, autofosforilação e ativação de seu domínio endorribonuclease. Referências relacionadas: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875
• O domínio endorribonuclease ativado cliva especificamente 26 nucleotídeos do mRNA XBP1, gerando um transcrito emendado que codifica um potente fator de transcrição que impulsiona a expressão de genes alvo da UPR. Referências relacionadas: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390
• IRE1 é uma proteína transmembrana residente no RE, com seus domínios quinase e RNase voltados para o citoplasma, e funciona como um sinal proximal para vias de tráfego não convencionais mediadas por estresse do RE, como a entrega de CFTR à membrana plasmática via modulação de GORASP2 e SEC16A. Referências relacionadas: PMID:21884936, PMID:28067262
• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, ADP-ribosilação e glicosilação, e abriga motivos funcionais-chave: um domínio quinase de ligação a ATP, um sensor luminal estabilizado por ligação dissulfeto e um sítio ativo endorribonuclease dependente de metal.
• IRE1 é expressa de forma ubíqua em tecidos humanos, com níveis particularmente altos no pâncreas, consistente com seu papel central na proteostase do RE.
• Isoformas alternativamente emendadas e polimorfismos do ERN1 podem ajustar finamente a intensidade da sinalização da UPR e contribuir para decisões de destino celular entre adaptação e apoptose.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para este anticorpo é uma proteína de fusão recombinante que abrange os aminoácidos 286–435 da IRE1 humana (NP_001424.3), que se encontra dentro das regiões dos domínios justamembrana e quinase. Esta região é conservada entre humano, rato e rato, apoiando a reatividade cruzada relatada.
• Para aplicações de Western blot, considere o uso de indutores de estresse do RE (por exemplo, tunicamicina, tapsigargina) para melhorar a detecção de IRE1, e valide o anticorpo no sistema de amostra relevante com controles de carga apropriados.
• No ELISA, otimize as condições de revestimento e detecção, pois o anticorpo reconhece um epítopo linear dentro da sequência do imunógeno.
• O peso molecular previsto é de ~110 kDa, mas modificações pós-traducionais e fosforilação induzida por ativação podem causar ligeiros deslocamentos de mobilidade; confirme com marcadores de peso molecular.

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