Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-IRE1 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - O75460

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRE1

• O IRE1 (ERN1) é uma serina/treonina proteína quinase e endorribonuclease que atua como um sensor crítico para a resposta à proteína desenovelada (UPR) no retículo endoplasmático (RE). Em células não estressadas, seu domínio luminal está ligado à chaperona HSPA5/BiP; após o acúmulo de proteínas mal dobradas, o HSPA5/BiP dissocia-se, permitindo que o IRE1 homodimerize, autofosforile-se e ative seu domínio endorribonuclease. Referências relacionadas: PMID:11175748, PMID:11779464, PMID:12637535, PMID:21317875

• A endorribonuclease ativada cliva especificamente o mRNA do XBP1, removendo um intron de 26 nucleotídeos para gerar um transcrito spliced que codifica um potente ativador transcricional que impulsiona a expressão de genes alvo da UPR. Referências relacionadas: PMID:11779464, PMID:21317875, PMID:24508390

• O IRE1 também participa do tráfego não convencional induzido por estresse do RE do CFTR para a membrana celular, modulando a expressão e localização da SEC16A. Referências relacionadas: PMID:21884936, PMID:28067262

• O IRE1 é uma proteína de membrana do tipo I de passagem única, localizada predominantemente na membrana do retículo endoplasmático.

• É expresso ubiquamente em tecidos humanos, com níveis elevados observados no pâncreas.

• A proteína sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo autofosforilação, ADP-ribosilação, glicosilação e formação de ligações dissulfeto, que regulam sua atividade.

• A proteína de comprimento total tem um peso molecular calculado de aproximadamente 110 kDa (UniProt: 109,7 kDa; informado pelo fornecedor 110 kDa).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 286–435 na região citoplasmática do IRE1 humano, que inclui parte do domínio quinase. Esta região é bem conservada entre humanos, camundongos e ratos, consistente com a reatividade cruzada relatada.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda em aproximadamente 110 kDa; use condições redutoras e valide com controles de carregamento apropriados e indutores de estresse do RE (por exemplo, tunicamicina, tapsigargina) para confirmar a especificidade.
• Em imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), a proteína está localizada no retículo endoplasmático; a permeabilização é necessária, e a co-coloração com marcadores do RE pode auxiliar na validação.
• Para aplicações de ELISA, considere usar o anticorpo como reagente de captura ou detecção e valide o desempenho com IRE1 recombinante ou lisados celulares de amostras tratadas versus não tratadas.

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