Anticorpo Policlonal Anti-KAP1/TRIM28 para WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13263

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de KAP1/TRIM28

• Também conhecido como fator intermediário de transcrição 1-beta (TIF1-beta), proteína 1 associada a KRAB (KAP-1) ou KRIP-1, esta proteína de 88,6 kDa da família do motivo tripartite (TRIM) apresenta regiões RING, B-box, coiled-coil, PHD e bromodomínio.
• Funciona como uma ligase E3 de SUMO e ubiquitina que estrutura complexos de repressão transcricional recrutando SETDB1 (histona metiltransferase) e o complexo NuRD (remodelação e desacetilação de nucleossomos), levando à metilação de H3K9 e formação de heterocromatina.
• Atua como um corepressor nuclear para proteínas de dedo de zinco contendo domínio KRAB (KRAB-ZFPs), mediando o silenciamento de retrovírus endógenos e genes críticos para o desenvolvimento embrionário e impressão genômica.
• Em células T reguladoras, coopera com a isoforma 2 de ZFP90 para potencializar a atividade repressora transcricional de FOXP3, essencial para a função supressora de Treg. Referências relacionadas: PMID:23543754
• Mantém um estado transcricional repressivo em células-tronco embrionárias (CTEs) indiferenciadas, preservando a pluripotência e o potencial de desenvolvimento precoce. Referências relacionadas: PMID:24623306
• Atua como um regulador positivo da sinalização de interferon tipo I (IFN-I) ao mediar a ubiquitinação ligada a Lys-63 de TBK1, facilitando a formação do complexo TBK1-IRF3. Referências relacionadas: PMID:38495890
• Regula a imunidade inata e a inflamação através da SUMOilação de mediadores-chave: a SUMOilação de TRAF6 controla o transporte núcleo-citoplasmático e a ativação de NF-kappa-B, enquanto a SUMOilação de NLRP3 estabiliza o inflamassoma e aumenta a ativação. Referências relacionadas: PMID:39920527, PMID:34373456
• Localiza-se predominantemente no núcleo e é amplamente expresso em tecidos humanos, incluindo baço, timo, próstata, testículo, ovário, intestino delgado, cólon e leucócitos do sangue periférico.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange a região C-terminal (aa 576-835) contendo o domínio PHD e o bromodomínio; o anticorpo policlonal resultante pode reconhecer KAP1/TRIM28 de comprimento total e possíveis variantes de splicing ou formas modificadas pós-traducionalmente.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em torno de 89 kDa (previsto 88,6 kDa); considere usar SDS-PAGE de 8–10% para resolução ideal e valide em lisados de células humanas, de camundongo ou de rato.
• Em ensaios de imunoprecipitação, otimize a concentração de anticorpo e as condições do tampão de lise; o crosslinking do anticorpo às microesferas pode melhorar a captura e reduzir a interferência das cadeias pesadas/leves.
• Para imunofluorescência/ICC, é esperada marcação nuclear; use fixação adequada (ex.: PFA 4%) e permeabilização (ex.: Triton X-100 0,1%) e inclua contracoloração com DAPI.
• Ao realizar imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação antigênica em tampão citrato (pH 6,0) é frequentemente benéfica; sempre inclua controles de tecido positivo e negativo para confirmar a especificidade.
• Para aplicações de ELISA, emparelhado com um anticorpo de detecção, determine empiricamente a concentração ideal de antígeno de revestimento e as diluições de anticorpo usando amostras positivas e negativas conhecidas.

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