Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Ki67 para IF/ICC, ELISA - P46013

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Ki67

• A proteína marcadora de proliferação Ki-67 (MKI67) associa-se à superfície dos cromossomos mitóticos e atua tanto como repelente de cromossomos durante a mitose precoce quanto como atrator de cromossomos durante a mitose tardia. Referências relacionadas: PMID:27362226, PMID:32879492, PMID:35513709
• Durante a mitose precoce, o Ki-67 é relocado dos nucléolos para a superfície dos cromossomos e forma estruturas estendidas semelhantes a escovas que impedem o colapso dos cromossomos, fornecendo uma barreira estérica e de carga eletrostática. Referências relacionadas: PMID:27362226
• Na anáfase mitótica, a desfosforilação do Ki-67 e a exposição de um patch básico conservado induzem a separação de fase líquido-líquido dependente de RNA na superfície dos cromossomos, promovendo o agrupamento dos cromossomos e a exclusão de grandes partículas citoplasmáticas do futuro espaço nuclear. Referências relacionadas: PMID:32879492, PMID:39153474, PMID:28935370
• O Ki-67 liga-se ao DNA superenrolado e ao DNA rico em AT, bem como a RNAs ribossomais prematuros, o que contribui para o seu papel na organização e manutenção dos cromossomos mitóticos. Referências relacionadas: PMID:10878551, PMID:24867636
• A proteína localiza-se nos núcleos de células em interfase, particularmente concentrada nos nucléolos, e associa-se aos cromossomos mitóticos durante a divisão celular (Localização subcelular: Cromossomo, Núcleo, Nucléolo).
• O Ki-67 sofre múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação e modificações semelhantes à ubiquitinação (ligação isopeptídica, conjugação Ubl), com a fosforilação/desfosforilação regulando a sua associação aos cromossomos e propriedades de separação de fase. Referências relacionadas: PMID:39153474

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 700-800 do Ki67 humano; esta região encontra-se dentro do domínio repetitivo central e é provável que seja acessível na proteína nativa.
• Para IF/ICC, considere otimizar a fixação e permeabilização celular para preservar a coloração nucleolar e dos cromossomos mitóticos. Células em proliferação, como HeLa ou Jurkat, podem servir como controlos positivos.
• Para ELISA, valide a reatividade do anticorpo usando fragmentos de Ki67 recombinante ou lisados de células inteiras de células em proliferação versus células quiescentes.
• Uma vez que o anticorpo reconhece o Ki67 humano, não se espera reatividade cruzada com outras espécies, a menos que exista alta homologia de sequência na região do imunogénio.

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