Anticorpo Monoclonal Anti-KIR2DL2/KIR2DL3 para WB, IF/ICC, FC, ELISA - P43628

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de KIR2DL2/KIR2DL3

• KIR2DL3 (Receptor semelhante a imunoglobulina de células killer 2DL3, também conhecido como CD158b, receptor NK p58, NKAT2) é uma glicoproteína transmembrana tipo I membro da família KIR. Funciona como um receptor inibitório em células natural killer (NK) para alótipos específicos de HLA-C, incluindo HLA-Cw1, Cw3 e Cw7.
• O receptor contém dois domínios extracelulares semelhantes a imunoglobulina do tipo C2, uma única hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática com motivos inibitórios baseados em tirosina de imunorreceptor (ITIMs) que recrutam fosfatases para bloquear sinais ativadores.
• A expressão de KIR2DL3 é amplamente restrita a células NK, onde media tolerância ao próprio e patrulha a ausência do próprio através do monitoramento da expressão de MHC classe I em células-alvo.
• O engajamento de KIR2DL3 por seu ligante suprime a citotoxicidade mediada por células NK, prevenindo a lise de células saudáveis enquanto permite a eliminação de células que reduziram a expressão de HLA-C.
• O domínio extracelular sofre glicosilação ligada a N e formação de ligações dissulfeto, contribuindo para as múltiplas formas de peso molecular observadas (~27 kDa não glicosilada e ~37–38 kDa glicosilada).
• KIR2DL2, codificado por um gene distinto, compartilha aproximadamente 96% de identidade de aminoácidos com KIR2DL3 e exibe especificidade semelhante para HLA‑C; o imunógeno do anticorpo (aa 22‑245 de KIR2DL3) abrange uma região conservada entre ambos os receptores, permitindo a detecção cruzada.
• O splicing alternativo do transcrito de KIR2DL3 pode produzir variantes com propriedades de ligação ao ligante ou sinalização alteradas, embora a isoforma de comprimento total seja a forma funcional predominante.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, espere bandas em torno de 27 kDa (não glicosilada) e 37–38 kDa (forma glicosilada). Use condições redutoras e carregue lisados totais de linhagens de células NK positivas para KIR (ex: NK92, YTS) como controles positivos. Considere a desglicosilação com PNGase F para simplificar o padrão de bandas.
• Como o imunógeno cobre o domínio extracelular, o anticorpo reconhece o receptor nativo de superfície; para citometria de fluxo e imunofluorescência, nenhuma permeabilização é necessária para coloração de superfície. Titular o anticorpo e incluir um controle isotípico para garantir a especificidade em PBMCs humanos ou células NK isoladas.
• Para aplicações de ELISA, este anticorpo monoclonal pode servir como reagente de captura ou detecção; se estiver construindo um imunoensaio sanduíche, emparelhe com um ligante para um epítopo separado. Valide com proteína KIR2DL3 recombinante ou lisados celulares.
• Confirme a reatividade cruzada com KIR2DL2 testando em linhagens celulares que expressam cada receptor individualmente (ex: transfectantes 293T), dada a alta homologia de sequência.
• Devido ao polimorfismo de KIR, os padrões de coloração podem variar entre doadores; otimize a concentração de anticorpo para cada aplicação e tipo celular.

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