Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-KLKB1 para WB, IHC-P, ELISA - P03952

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do KLKB1

• O KLKB1 codifica a pré-calicreína plasmática, o zimogênio da calicreína plasmática, uma serina protease que circula no sangue como um precursor inativo.
• Após a ativação, a calicreína plasmática participa da ativação da coagulação sanguínea dependente de superfície ao ativar reciprocamente o fator de coagulação XII (FXII) após se ligar a superfícies carregadas negativamente.
• Ela libera o peptídeo vasoativo bradicinina do cininogênio de alto peso molecular (HMWK), conectando o sistema de ativação por contato à inflamação e à permeabilidade vascular.
• A calicreína plasmática também pode contribuir para o sistema renina-angiotensina ao converter a pró-renina em renina ativa.
• A localização subcelular é exclusivamente extracelular; a proteína é secretada no plasma, onde normalmente é encontrada.
• A proteína contém um peptídeo sinal, múltiplos domínios Apple para interações proteína-proteína e um domínio de serina protease semelhante à tripsina; é N-glicosilada e estabilizada por ligações dissulfeto.
• Variantes genéticas no KLKB1 estão associadas à deficiência de pré-calicreína (traço de Fletcher), uma condição rara com tempo de tromboplastina parcial ativada prolongado, mas tipicamente sem tendência a sangramento.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 20–300 da cadeia pesada, que contém os quatro domínios Apple responsáveis pela ligação ao HMWK e a superfícies carregadas negativamente; esta região é altamente conservada entre humano, camundongo e rato, suportando a reatividade cruzada observada.
• Para Western blotting, uma banda próxima a 71 kDa (pré-calicreína) ou ~85 kDa (forma de comprimento total com glicosilação) pode ser detectada; a redução com DTT/TCEP é recomendada para resolver cadeias ligadas por dissulfeto.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), considere a recuperação antigênica com tampão citrato (pH 6.0) e um sistema de detecção sensível para anticorpos primários de coelho; soro pré-imune ou controles com peptídeo bloqueador são aconselhados para confirmar a especificidade.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; no entanto, o emparelhamento com um anticorpo monoclonal para um epítopo distinto pode melhorar a sensibilidade e a especificidade.
• Como a calicreína plasmática é abundante no sangue, a pré-adsorção do anticorpo policlonal contra proteínas séricas de camundongo/rato imobilizadas pode reduzir o fundo em aplicações com tecidos de roedores se ligação inespecífica for observada.
• Valide o desempenho em seu tipo de amostra específico (plasma, soro, lisado de tecido) incluindo controles positivos (ex.: calicreína plasmática purificada ou plasma ativado) e controles negativos (plasma esgotado de KLKB1 ou linhagens celulares knockout, se disponíveis).

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