Anticorpo Policlonal Anti-KPNA4 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - O00629

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do KPNA4

• O KPNA4 codifica a subunidade alfa-3 da importina (também conhecida como importina alfa Q1, Qip1 ou subunidade alfa-4 da carioferina), uma proteína adaptadora de 58 kDa crítica para a importação nuclear clássica. Referências relacionadas: PMID:20818336
• Funciona ligando-se a substratos que contêm sinais de localização nuclear (NLS) simples ou bipartidos e ligando-os à importina beta (KPNB1) para transporte através do complexo de poro nuclear (NPC). Referências relacionadas: PMID:20818336, PMID:28760339, PMID:29042532
• O complexo importina-substrato atraca no NPC através de interações KPNB1–nucleoporina e transloca de maneira dependente de Ran-GTP e que requer energia; a direcionalidade é alcançada pela distribuição assimétrica de Ran-GTP e Ran-GDP. Referências relacionadas: PMID:20818336, PMID:28760339, PMID:29042532
• O KPNA4 medeia a importação nuclear de diversas cargas, incluindo AARS1, MRTFA e RANBP3, e também facilita a entrada nuclear de proteínas virais, como a UL84 do citomegalovírus humano, através do reconhecimento de NLS não clássico. Referências relacionadas: PMID:10567565, PMID:20818336, PMID:28760339
• Subcelularmente, o KPNA4 localiza-se tanto no citoplasma quanto no núcleo, consistente com o seu papel no transporte de cargas para o núcleo.
• A proteína é altamente expressa em testículo, ovário, intestino delgado, coração, músculo esquelético, pulmão e pâncreas, com baixa expressão em rim, timo, cólon e leucócitos de sangue periférico.
• Modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação; a proteína contém domínios de repetição Armadillo essenciais para a ligação ao NLS e é classificada como membro do proteoma de referência envolvido no transporte de proteínas e interações hospedeiro-vírus.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno tem como alvo os aminoácidos 1–240 da extremidade N-terminal do KPNA4 humano, o que pode conferir especificidade para a subunidade alfa da importina sobre outros membros da família das carioferinas; no entanto, recomenda-se a validação no sistema modelo relevante.
• Para Western blotting, espera-se uma banda próxima de 58 kDa em condições redutoras; a titulação da concentração do anticorpo é aconselhada para uma relação sinal-ruído ideal.
• Em imunocitoquímica e imunofluorescência, uma vez que o KPNA4 transita entre o citoplasma e o núcleo, ambos os compartimentos podem mostrar coloração; o acúmulo nuclear pode ser mais proeminente sob certas condições.
• Para imuno-histoquímica em secções de parafina, a recuperação de antígeno e a otimização em matrizes de tecidos contendo tecidos com alta e baixa expressão (por exemplo, testículo vs. rim) podem ajudar a confirmar a especificidade.
• O anticorpo reage cruzadamente com camundongo e rato, tornando-o adequado para estudos ortólogos; no entanto, a reatividade cruzada deve ser verificada no lisado de cada espécie.
• Ao utilizar para ELISA, considere que os anticorpos policlonais podem fornecer uma cobertura mais ampla de epítopos, mas também podem apresentar maior fundo; a otimização das etapas de bloqueio e lavagem é crítica.

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