Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-KRAS+HRAS+NRAS para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P01111/P01112/P01116

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de KRAS+HRAS+NRAS

• NRAS atua como transdutor de sinal na via de sinalização RAS-MAPK, regulando a proliferação e sobrevivência celular por meio da ligação cíclica de GDP/GTP e da atividade intrínseca de GTPase (PubMed:30712867).
  Referências relacionadas: PMID:30712867
• KRAS, HRAS e NRAS compartilham alta similaridade de sequência, especialmente no domínio N-terminal (aa 1-100), que é a região do imunógeno, permitindo que este anticorpo detecte todas as três isoformas.
• Mutações oncogênicas no NRAS (comumente nos códons 12, 13 e 61) são frequentes em cânceres humanos, e o anticorpo reconhece tanto a forma selvagem quanto a mutante, tornando-o valioso para pesquisa oncológica.
• NRAS se localiza principalmente na membrana plasmática e no aparelho de Golgi, onde media eventos de sinalização nesses locais.
• Modificações pós-traducionais, como prenilação e palmitoilação, são críticas para o direcionamento à membrana e a atividade biológica do NRAS.
• A E3 ubiquitina ligase LZTR1 media a ubiquitinação de NRAS, levando à degradação proteassômica e atuando como mecanismo regulatório (PubMed:40934300).
  Referências relacionadas: PMID:40934300

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 1-100 do Ras humano (P01111), uma região conservada entre KRAS, HRAS e NRAS. Considere validar a especificidade usando linhagens celulares com knockdown ou knockout específico para isoforma, se necessário.
• Para western blotting (WB), uma banda em torno de 21 kDa é esperada em condições redutoras. Inclua controles de carregamento apropriados e considere o uso de tampão de lise RIPA para extração eficaz do Ras associado à membrana.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), proteínas Ras são tipicamente observadas na membrana plasmática e no Golgi; a permeabilização é necessária. Não é esperada coloração nuclear.
• Para imunoprecipitação (IP), use tampões de lise otimizados contendo detergentes não iônicos e inibidores de protease/fosfatase para preservar as interações proteína-proteína. A pré-limpeza e a titulação do anticorpo podem melhorar a especificidade.
• O desempenho do ELISA deve ser avaliado com proteína Ras recombinante ou lisados celulares; o limite de detecção dependerá do formato do ensaio e do sistema de detecção utilizados.

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