Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Ku80 para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P13010

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Ku80

• A proteína Ku80, também conhecida como XRCC5, KU86, KUB2 ou NFIV, é a subunidade de 86 kDa do autoantígeno Ku, um complexo heterodimérico de ligação ao DNA essencial para o reparo de quebras duplas do DNA (DSB) pela via clássica de junção não homóloga de terminais (NHEJ). Juntamente com XRCC6 (Ku70), forma o heterodímero Ku70:Ku80 que se liga diretamente aos terminais dos DSB e atua como um arcabouço para a montagem da maquinaria principal de reparo NHEJ, incluindo PRKDC (DNA-PKcs), para alinhar e ligar os terminais quebrados do DNA. Referências relacionadas: PMID:11493912, PMID:33854234, PMID:34352203
• O Ku80 é indispensável para a recombinação V(D)J, um processo especializado dirigido por NHEJ que gera o repertório diversificado de receptores de células T e imunoglobulinas durante o desenvolvimento linfocitário. Referências relacionadas: PMID:9742108
• Além do seu papel estrutural, o Ku80 possui atividade de 5'-desoxirribose-5-fosfato liase, que limpa locais abásicos próximos aos terminais dos DSB para prepará-los para a ligação. Também foi descrita uma atividade de DNA helicase 3'-5', embora sua significância in vivo permaneça incerta. Referências relacionadas: PMID:20383123, PMID:7957065
• O Ku80 está implicado na manutenção dos telômeros, contribuindo para a proteção e regulação das extremidades dos cromossomos. Referências relacionadas: PMID:29490055
• Além do reparo do DNA, o Ku80 atua como cofator transcripcional, regulando a expressão gênica ao interagir com diversos fatores de transcrição. Referências relacionadas: PMID:12145306, PMID:8621488
• O Ku80 participa da resposta imune inata a vírus de DNA ao se montar no complexo HDP-RNP, que atua como plataforma para a fosforilação de IRF3 e ativa a via cGAS-STING. Referências relacionadas: PMID:28712728
• O Ku80 pode ligar RNAs celulares e recrutar PRKDC, desempenhando um papel na biogênese de ribossomos, especialmente através da interação com o RNA nucleolar pequeno U3. Referências relacionadas: PMID:32103174
• Localizado predominantemente no núcleo e nucléolo, o Ku80 se associa à cromatina e está sujeito a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação, ADP-ribosilação e conjugação ubiquitina-like.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Design do imunógeno: O anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 633–732 do Ku80 humano. Ao planejar experimentos de validação, considere que esta região pode estar sujeita a modificações pós-traducionais ou eventos de splicing alternativo que podem afetar a ligação do anticorpo.
• Western blotting (WB): Espere uma banda específica em aproximadamente 83 kDa em lisados de células humanas. Inclua controles positivos e negativos adequados (por exemplo, amostras com knockout de Ku80 ou tratadas com siRNA) para confirmar a especificidade.
• Imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC): O Ku80 exibe localização nuclear e nucleolar. Otimize as condições de fixação e permeabilização para o seu tipo de tecido ou célula, e valide a coloração com um marcador nuclear conhecido.
• Imunoprecipitação (IP): Este anticorpo pode ser usado para purificar o complexo Ku70/Ku80. A co-imunoprecipitação de Ku70 (XRCC6) serve como controle funcional.
• ELISA: Adequado para formatos de ELISA direto ou sanduíche. Valide a reatividade cruzada com outras espécies, se necessário, pois o anticorpo é especificado para reatividade humana.

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