Anticorpo Policloonal de Coelho Anti-LMAN1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P49257

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de LMAN1

• Codificada pelo gene LMAN1, a Proteína ERGIC-53 (também conhecida como gp58, MR60 ou lectina de ligação a manose 1) é uma proteína transmembrana de 510 aminoácidos com peso molecular previsto de ~57,5 kDa e uma banda observada em aproximadamente 54 kDa.
• Atua como uma lectina específica para manose que provavelmente reconhece resíduos de açúcar em glicoproteínas, glicolipídios ou ancoragens GPI, e participa da classificação e reciclagem de proteínas na via secretora inicial.
• Forma um complexo receptor de carga específico do RE para o Golgi com MCFD2, mediando o transporte direcionado de glicoproteínas selecionadas (por exemplo, fatores de coagulação V e VIII) do retículo endoplasmático para o Golgi.
• É expressa de forma ubíqua em todos os tecidos humanos, o que é consistente com seu papel fundamental no tráfego intracelular.
• Localização subcelular: circula entre o compartimento intermediário ER-Golgi (ERGIC), o aparelho de Golgi e as membranas do retículo endoplasmático.
• Modificações pós-traducionais incluem fosforilação e formação de pontes dissulfeto; contém uma única hélice transmembrana e requer ligação a metais para a função adequada da lectina.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado foi um fragmento recombinante que compreende os aminoácidos 270–480 de LMAN1 humano (NP_005561.1), que corresponde a uma grande porção do domínio luminal da proteína; essa região pode apresentar epítopos conformacionais favoráveis para a detecção de LMAN1 endógeno.
• Para Western blot (WB), é esperada uma banda em torno de 54 kDa em lisados de células humanas, de camundongo ou de rato; otimize a carga e a diluição do anticorpo usando controles positivos (por exemplo, células HeLa ou tecido hepático) conhecidos por expressar ERGIC-53.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), considere a recuperação de antígeno com tampão de citrato (pH 6,0) e teste em cortes de tecidos incluídos em parafina e fixados em formalina, como fígado, pâncreas ou cólon, onde LMAN1 é abundante.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), utilize uma etapa de permeabilização para detectar a proteína nas membranas do ERGIC/RE/Golgi; a co-coloração com marcadores de organelas (por exemplo, GM130 para o cis-Golgi) pode confirmar o padrão reticular perinuclear característico.
• Em aplicações de ELISA, a natureza policlonal desse anticorpo pode fornecer uma ampla cobertura de epítopos, mas as condições de diluição e bloqueio devem ser otimizadas empiricamente para o formato de ensaio específico.

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