Anticorpo Policlonal Anti-LRRK2 para WB, IHC-P, ELISA - Q5S007

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do LRRK2

• LRRK2 (proteína quinase serina/treonina de repetições ricas em leucina 2), também conhecida como Dardarin, é uma grande proteína multidomínios que contém um domínio quinase, um domínio Roc GTPase, um domínio COR e repetições WD40. Exibe atividades de quinase serina/treonina e GTPase. Referências relacionadas: PMID:18230735
• O LRRK2 fosforila uma ampla gama de proteínas, incluindo GTPases RAB (RAB3A/B/C/D, RAB5A/B/C, RAB8A/B, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43), PRDX3, APP e RIPK2, regulando a plasticidade neuronal, a autofagia, a imunidade inata e o tráfego de vesículas. Referências relacionadas: PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718, PMID:21850687, PMID:27830463
• Atua como um regulador chave da ciliogênese primária ao fosforilar RAB8A e RAB10, promovendo assim a sinalização Sonic Hedgehog (SHH) no cérebro. Referências relacionadas: PMID:29125462, PMID:30398148
• O LRRK2 regula positivamente a autofagia através da ativação dependente de cálcio da via de sinalização CaMKK/AMPK, envolvendo a liberação de cálcio lisossomal. Referências relacionadas: PMID:22012985
• Mutações no LRRK2 estão ligadas à doença de Parkinson familiar e esporádica, tornando-o um alvo chave para a pesquisa em neurodegeneração.
• A nível subcelular, o LRRK2 localiza-se em vesículas citoplasmáticas, no aparelho de Golgi, endossomos, lisossomos, mitocôndrias, vesículas sinápticas, fagossomos e no citoesqueleto, e é encontrado em corpos celulares neuronais, axónios e dendritos.
• Especificidade tecidual: Altamente expresso no cérebro, particularmente em neurónios piramidais do córtex visual, substância negra parte compacta e putámen caudado; também expresso no coração, fígado, placenta, pulmão, músculo esquelético, rim e pâncreas (ao nível proteico). Referências relacionadas: PMID:29127255
• O LRRK2 está envolvido na via de tráfego retrógrado dos lisossomos para o Golgi, interagindo com o RAB29 e o complexo retromer para reciclar proteínas como o M6PR. Referências relacionadas: PMID:23395371
• Após o recrutamento pelo RAB29 para lisossomos sobrecarregados, o LRRK2 fosforila e estabiliza o RAB8A e o RAB10, promovendo a libertação do conteúdo lisossomal e regulando a morfologia lisossomal via EHBP1 e EHBP1L1. Referências relacionadas: PMID:30209220, PMID:38227290

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, considere o uso de um gel SDS-PAGE de 6-8% e tempos de transferência prolongados devido ao alto peso molecular do LRRK2 (~286 kDa).
• Valide a especificidade do anticorpo usando lisados celulares ou tecidos com knockout ou knockdown de LRRK2, especialmente em modelos de cérebro ou células imunes.
• Para IHC-P, otimize a recuperação de antigénio e a diluição do anticorpo usando secções de cérebro humano ou de roedores conhecidas por expressarem LRRK2, como a substância negra ou o córtex.
• Em ELISA, use fragmentos recombinantes de LRRK2 ou lisados celulares como antigénios de captura e considere o bloqueio com BSA ou caseína para reduzir o ruído de fundo.
• Por se tratar de um anticorpo policlonal, esteja ciente da possível variabilidade entre lotes; valide cada novo lote quanto à consistência na sua aplicação.

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