Anticorpo monoclonal de coelho anti-LRRK2 para WB, ELISA - Q5S007

Especificações e parâmetros essenciais do produto

Contexto biológico: função e localização da LRRK2

• A LRRK2 (quinase 2 de proteínas serina/treonina com repetições ricas em leucina), também conhecida como Dardarin ou PARK8, é uma proteína multidomínio de grandes dimensões que possui atividades de quinase de serina/treonina e GTPase; a função GTPase, mediada pelo domínio Roc, regula sua atividade de quinase. Referências relacionadas: PMID:18230735, PMID:26824392, PMID:28720718
• Esta quinase fosforila uma ampla variedade de substratos envolvidos em processos celulares essenciais, incluindo plasticidade neuronal, imunidade inata, autofagia e tráfego vesicular. Referências relacionadas: PMID:17114044, PMID:20949042, PMID:21850687
• A LRRK2 é um regulador principal das GTPases RAB; fosforila vários membros da família RAB (RAB3, RAB5, RAB8, RAB10, RAB12, RAB29, RAB35, RAB43), controlando assim sua troca de GDP/GTP e suas interações com efetores. Referências relacionadas: PMID:23395371, PMID:26824392, PMID:28720718
• A LRRK2 regula positivamente a autofagia por meio de um mecanismo dependente de cálcio que ativa a via de sinalização CaMKK/AMPK, envolvendo a liberação de cálcio lisossômico. Referências relacionadas: PMID:22012985
• Nos neurônios, a LRRK2 modula a morfologia dos prolongamentos, o tráfego de vesículas sinápticas e a ciliogênese primária; fosforila RAB8A e RAB10 para promover a sinalização do sonic hedgehog (SHH) no cérebro. Referências relacionadas: PMID:17114044, PMID:24687852, PMID:29125462, PMID:30398148
• As mutações no gene LRRK2 são a causa genética mais comum da doença de Parkinson familiar (PARK8) e também contribuem para casos esporádicos.
• Subcelularmente, a LRRK2 localiza-se em numerosos compartimentos de membrana, incluindo o aparelho de Golgi, o retículo endoplasmático, os endossomos, os lisossomos, as mitocôndrias e as vesículas sinápticas; também é encontrada no citosol e associada ao citoesqueleto.
• A LRRK2 é amplamente expressa, com níveis elevados no cérebro, coração e fígado; no sistema nervoso central, é proeminente nas áreas dopaminoceptivas e nos neurônios piramidais corticais.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 100–340 da LRRK2 humana, uma região N-terminal; considere a acessibilidade do epítopo em condições nativas versus desnaturantes ao projetar ensaios de detecção.
• Para Western blotting, utilize géis de SDS-PAGE de baixa porcentagem e tempos de transferência prolongados, adequados para proteínas de alto peso molecular (~286 kDa).
• Em aplicações de ELISA, valide a detecção utilizando proteína LRRK2 recombinante ou lisados de linhagens celulares que expressem o alvo endogenamente.
• A reatividade cruzada foi confirmada para humanos; para outras espécies, avalie a homologia da sequência da região do imunógeno e realize um experimento-piloto.

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