Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-LSD2/KDM1B/AOF1 para WB, ELISA - Q8NB78

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de LSD2/KDM1B/AOF1

• LSD2/KDM1B/AOF1 é uma histona demetilase lisina-específica que remove especificamente grupos mono- e di-metil da lisina 4 da histona H3 (H3K4me1/2), atuando assim como um corepressor transcricional.
• Não apresenta atividade contra H3K4 trimetilado, ou H3K9, H3K27, H3K36 ou H4K20 metilados, demonstrando alta especificidade pelo substrato.
• A enzima é necessária para a metilação de novo do DNA em um subconjunto de genes impressos durante a oogênese, ligando-a à programação epigenética do desenvolvimento.
• A catálise ocorre por meio da oxidação dependente de FAD do substrato, formando um intermediário imino que é subsequentemente hidrolisado.
• Sozinho, LSD2 tem atividade mínima sobre substratos nucleossômicos; a associação com GLYR1 forma um complexo que demetila eficientemente H3K4me em nucleossomos, facilitando a transcrição da Pol II através da cromatina. Referências relacionadas:
  PMID:30970244
• Subcelularmente, a proteína se localiza no núcleo e está associada aos cromossomos, o que é consistente com seu papel na modificação da cromatina.
• A proteína possui domínios de dedo de zinco e motivos de ligação a FAD, classificando-a como regulador da cromatina e flavoproteína.
• Modificações pós-tradução incluem fosforilação, e existem múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno tem como alvo a região N-terminal (aa 1-100); portanto, isoformas que não possuem essa região ou com truncamentos N-terminais podem não ser detectados. Realize a verificação nos sistemas relevantes.
• Para Western blot, extratos nucleares são recomendados para enriquecer essa proteína ligada à cromatina. Otimize a diluição do anticorpo usando um controle positivo, como lisados de células HeLa ou HEK-293.
• O peso molecular esperado é de ~92 kDa. Confirme a identidade da banda com marcadores de peso molecular apropriados e considere o uso de agentes de bloqueio otimizados para fosfoproteínas se estiver estudando formas fosforiladas.
• Reatividade cruzada foi observada em amostras humanas, de camundongo e de rato. Ao usar amostras de outras espécies, realize experimentos de validação inicial.
• Para aplicações de ELISA, titule a concentração do anticorpo e confirme a especificidade usando ensaios de bloqueio com proteína recombinante ou peptídeo.

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