Anticorpo policlonal anti-MAD2/MAD2L1 para IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q13257

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de MAD2/MAD2L1

• MAD2L1 codifica a proteína MAD2A do ponto de verificação da montagem do fuso mitótico (também conhecida como proteína 1 semelhante a MAD2), um regulador crítico da fidelidade da segregação cromossômica.
• MAD2L1 é um componente central do complexo do ponto de verificação mitótico (MCC), que inibe o complexo promotor da anáfase/ciclossomo (APC/C) para atrasar a segregação cromossômica até que todos os cromossomos estejam corretamente ligados ao fuso mitótico. Referências relacionadas: PMID:10700282 PMID:11804586 PMID:15024386
• O MCC, composto por CDC20, MAD2L1/MAD2, BUB1B/BUBR1 e BUB3, atua como o principal efetor do ponto de verificação da montagem do fuso. Referências relacionadas: PMID:15020684 PMID:27509861
• O APC/C ligado ao MCC permanece inativo, impedindo a transição da metáfase para a anáfase; o silenciamento do ponto de verificação desencadeia a auto-ubiquitinação de CDC20 mediada por UBCH10, levando à reativação do APC/C. Referências relacionadas: PMID:27509861
• MAD2L1 sofre uma mudança conformacional dinâmica: o conformero fechado (C-MAD2) forma um complexo com MAD1L1 nos cinetócoros não ligados, recrutando MAD2 aberto (O-MAD2) e catalisando sua conversão em C-MAD2, amplificando assim a sinalização do ponto de verificação. Referências relacionadas: PMID:29162720
• Subcelularmente, MAD2L1 localiza-se no núcleo, nos cinetócoros dos centrômeros, nos polos do fuso e no citoplasma, refletindo suas funções mitóticas multifacetadas.
• A proteína está sujeita à acetilação e fosforilação, e o splicing alternativo gera múltiplas isoformas; essas modificações e variantes podem modular a atividade do ponto de verificação e as interações proteicas.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos 205 aminoácidos N-terminais de MAD2L1 humano; considere verificar a especificidade da isoforma e da espécie em seu sistema de ensaio específico, pois pode ocorrer reatividade cruzada com proteínas estreitamente relacionadas.
• Para imunohistoquímica (IHC-P), os métodos de recuperação antigênica e as condições de fixação podem influenciar a coloração; recomenda-se a otimização utilizando controles positivos apropriados (por exemplo, tecidos mitóticos) e controles negativos.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), espere marcação dos cinetócoros e dos polos do fuso durante a mitose; a co-coloração com marcadores de centrômeros ou tubulina pode ajudar a confirmar o reconhecimento do alvo.
• Para ELISA, a proteína MAD2L1 recombinante purificada pode servir como controle positivo; recomenda-se titular as concentrações de anticorpo e antígeno para estabelecer relações ideais entre sinal e ruído.
• Sempre valide o anticorpo em suas amostras específicas e no contexto de aplicação, pois o desempenho pode variar entre tipos celulares e condições experimentais.

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