Anticorpo Policloal de Coelho Anti-MAD2/MAD2L1 para WB, ELISA - Q13257

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína MAD2A do Ponto de Verificação da Montagem do Fuso Mitótico

• MAD2L1 (MAD2A) é um componente crucial do complexo de checkpoint mitótico (MCC), que inibe o complexo promotor da anáfase/ciclossoma (APC/C) para atrasar a segregação dos cromossomos até que todos os cromossomos estejam corretamente ligados ao fuso mitótico.
  Referências relacionadas:
  PMID:10700282
  PMID:11804586
  PMID:15024386
• O MCC é composto por CDC20, MAD2L1, BUB1B/BUBR1 e BUB3; sua ligação ao APC/C mantém o complexo em estado inativo, prevenindo o início prematuro da anáfase.
  Referências relacionadas:
  PMID:15020684
  PMID:27509861
• Após a silenciamento do ponto de verificação da montagem do fuso, o complexo MCC-APC/C recruta a enzima E2 UBCH10, levando à auto-ubiquitinação e degradação de CDC20. Isso reativa o APC/C, impulsionando a transição metáfase/anáfase.
  Referências relacionadas:
  PMID:27509861
• MAD2L1 adota duas conformações distintas: aberta (O-MAD2) e fechada (C-MAD2). A forma fechada se monta com MAD1L1 nos cinetocoros não acoplados para criar um modelo que catalisa a conversão de O-MAD2 para C-MAD2, amplificando o sinal do ponto de verificação.
  Referências relacionadas:
  PMID:29162720
• O splicing alternativo produz duas isoformas (MAD2A e MAD2B); MAD2A (codificada por MAD2L1) é a isoforma regulada mitoticamente, essencial para a função do ponto de verificação do fuso.
• A proteína se localiza dinamicamente ao longo do ciclo celular: reside no citoplasma e no núcleo durante a interfase, concentra-se nos cinetocoros e polos do fuso durante a mitose e se relocaliza após a ativação do ponto de verificação.
• Modificações pós-traducionais, incluindo acetilação e fosforilação, ajustam finamente a atividade e as interações de MAD2L1. Seu peso molecular calculado pelo UniProt é de ~23,5 kDa, enquanto os dados do produto indicam ~24 kDa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aa 1-205) abrange a região N-terminal crítica para a interação com MAD1 e a mudança conformacional. Este projeto pode permitir a detecção de ambas as formas O-MAD2 e C-MAD2.
• Para Western blot, espera-se uma banda próxima a 24 kDa. Use células sincronizadas mitoticamente (por exemplo, tratadas com nocodazol) junto com controles de interfase para confirmar a especificidade.
• Aplicações de ELISA podem utilizar formatos diretos ou sanduíche; considere usar a proteína MAD2L1 recombinante como padrão.
• Prevê-se que o anticorpo tenha reatividade cruzada com MAD2L1 de camundongo e rato com base na conservação da sequência; recomenda-se a validação em lysados de tecidos ou células adequados.
• Para estudos funcionais, combine com protocolos de sincronização celular para enriquecer populações mitóticas e melhorar a detecção do sinal.

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