Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-MDA5 para WB, ELISA - Q9BYX4

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do MDA5

• MDA5 (IFIH1), também conhecido como Helicard, RLR-2 ou proteína 5 associada à diferenciação de melanoma, é um membro da família dos receptores do tipo RIG-I (RLR) de helicases de RNA citoplasmáticas da caixa DExD/H.
• Ele atua como um sensor da imunidade inata para ácidos nucleicos virais e desempenha um papel importante no início das respostas antivirais, incluindo a indução de interferons do tipo I e citocinas pró-inflamatórias (PubMed:28594402, PubMed:32169843, PubMed:33727702). Referências relacionadas: PMID:28594402 PMID:32169843 PMID:33727702
• MDA5 reconhece RNA de fita dupla longa (>1 kb de comprimento) e mRNA sem 2'-O-metilação em sua capa 5' como padrões moleculares associados a patógenos (PubMed:22160685). Referências relacionadas: PMID:22160685
• Após a ligação ao ligante, o MDA5 se associa à proteína de sinalização antiviral mitocondrial MAVS, desencadeando a ativação da quinase TBK1/IKBKE e a fosforilação de IRF3/IRF7 para promover a transcrição dos genes de interferon.
• Este receptor detecta um amplo espectro de vírus, incluindo picornavírus como EMCV e rinovírus, flavivírus como dengue e vírus do Nilo Ocidental, reovírus, vírus vaccínia e o coronavírus SARS-CoV-2 (PubMed:28606988, PubMed:33440148, PubMed:33514628). Referências relacionadas: PMID:28606988 PMID:33440148 PMID:33514628
• Subcelularmente, o MDA5 é encontrado no citoplasma, núcleo e mitocôndrias.
• Ele é amplamente expresso em níveis baixos, com abundância relativamente maior em placenta, pâncreas e baço, e é quase indetectável no cérebro, testículo e pulmão.
• MDA5 é uma fosfoproteína que contém domínios CARD, um domínio helicase dependente de ATP da caixa DExD/H e um domínio C-terminal; ele está sujeito a ubiquitinação regulatória.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo compreende os aminoácidos 277–490 do IFIH1 humano; ele pode detectar a proteína de comprimento total (~117 kDa), bem como potenciais isoformas mais curtas ou produtos de clivagem.
• Para Western blotting, considere utilizar lisados de células humanas estimuladas por interferon ou infectadas por vírus para aumentar a expressão de MDA5. Inclua controles positivos e negativos apropriados e verifique os tamanhos das bandas em relação aos pesos moleculares previstos.
• Ao realizar ELISA, otimize as condições de revestimento e detecção utilizando o anticorpo em combinação com padrões recombinantes ou nativos de MDA5 apropriados; a reatividade cruzada com outros membros da família RLR deve ser avaliada.
• Como com qualquer anticorpo policlonico, a variabilidade entre lotes pode afetar o desempenho; recomendamos titular e validar cada novo lote no seu sistema de ensaio específico.

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