Anticorpo Policlonais Anti-Mesotelina para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q13421

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Mesotelina

• A mesotelina, também conhecida como antígeno CAK1 ou fator potenciador de pré-pro-megacariócitos, é codificada pelo gene MSLN e existe em múltiplas isoformas por meio de splicing alternativo.
• A proteína é sintetizada como um precursor que é clivado em uma mesotelina madura ancorada na membrana ligada a GPI e em um fator potenciador de megacariócitos (MPF) secretado.
• Acredita-se que a mesotelina ancorada na membrana desempenhe um papel na adesão celular, potencialmente mediando interações entre células mesoteliais e outros tipos celulares.
• O MPF, o fragmento secretado, foi inicialmente identificado por sua capacidade de potencializar a formação de colônias de megacariócitos in vitro.
• Subcelularmente, a mesotelina se localiza na membrana celular por meio de sua âncora GPI, bem como no aparelho de Golgi durante a biossíntese; o fragmento MPF é secretado para o meio extracelular.
• A expressão tissular é mais proeminente nas células pulmonares e mesoteliais, com níveis mais baixos no coração, placenta e rim; em nível proteico, é altamente superexpresso em mesoteliomas, cânceres de ovário e certos carcinomas de células escamosas.
• As principais modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada, formação de pontes dissulfeto, fosforilação e fixação da âncora GPI, todas contribuindo para suas propriedades estruturais e funcionais.
• As palavras-chave do UniProt destacam seu envolvimento na adesão celular, sua associação com a membrana e sua relevância para doenças por meio da expressão aberrante em cânceres.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno foi projetado contra os aminoácidos 296–606 da Mesotelina humana, cobrindo o domínio extracelular; esta região pode ser parcialmente compartilhada com o fragmento MPF, potencialmente permitindo a detecção de ambas as formas.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em torno de 69 kDa para o precursor de comprimento total ou a forma ancorada na membrana; bandas adicionais em torno de 30–40 kDa podem representar o fragmento MPF liberado.
• Ao realizar IHC-P, considere a recuperação de antígeno em pH 6 ou 9 e valide a especificidade da coloração usando cortes de tecido de mesotélio ou câncer de ovário conhecidos por expressar altos níveis de Mesotelina.
• Para IF-P, fixe as células com paraformaldeído e permeabilize adequadamente; confirme a localização do sinal na membrana celular e no aparelho de Golgi.
• Valide a reatividade com amostras humanas, de camundongo e de rato usando linhas celulares positivas e negativas conhecidas; por exemplo, OVCAR-3 (câncer de ovário humano) ou AB22 (mesotelioma de camundongo) como controles positivos.
• Aplicações de ELISA podem se beneficiar do teste de formatos de captura e detecção com a proteína recombinante de Mesotelina/MPF como padrão.
• Observe que o anticorpo pode detectar tanto formas ligadas à membrana quanto solúveis; considere a preparação da amostra (lisado celular vs. meio condicionado) para distingui-las.

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