Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Mesotelina para WB, ELISA - Q13421

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Mesotelina

• A mesotelina é codificada pelo gene MSLN e produzida como uma proteína precursora que é clivada em dois produtos: o fator potenciador de megacariócitos (MPF) e a mesotelina madura ligada à membrana.
• A mesotelina ancorada à membrana pode desempenhar um papel na adesão celular, estando potencialmente envolvida nas interações célula-célula ou célula-matriz.
• O fator potenciador de megacariócitos (MPF) atua como uma citocina que pode potenciar a formação de colônias de megacariócitos in vitro, sugerindo um papel na hematopoiese.
• A proteína se localiza na membrana celular por meio de uma âncora GPI, e também é encontrada no aparelho de Golgi e em formas secretadas após clivagem e liberação.
• A mesotelina é expressa em células mesoteliais que revestem a pleura, peritônio e pericárdio; em níveis mais baixos no pulmão, coração, placenta e rim.
• Ela é altamente superexpressa em mesoteliomas, cânceres de ovário e alguns carcinomas de células escamosas, o que a torna um marcador tumoral útil e um alvo terapêutico.
• As modificações pós-traducionais incluem formação de pontes dissulfeto, glicosilação N-ligada e fixação de âncora GPI, que são fundamentais para sua estabilidade e associação à membrana.
• Eventos de splicing alternativo, fosforilação e clivagem proteolítica regulam suas múltiplas formas funcionais e distribuições subcelulares.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde ao domínio extracelular (aa 296–606) da Mesotelina humana, que é conservado em camundongos (com base na reatividade cruzada), tornando-o adequado para detecção de amostras humanas e de camundongo em WB e ELISA.
• Para Western blotting, considere que o precursor de comprimento total (~69 kDa) é clivado, portanto múltiplas bandas podem ser observadas dependendo da amostra (por exemplo, ~40 kDa de mesotelina madura e ~31 kDa de MPF). Valide com proteína recombinante ou lisados de linhas celulares de alta expressão (por exemplo, linhas de câncer de ovário como OVCAR-3 ou linhas de mesotelioma).
• Em ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; a concentração ótima de revestimento e o pareamento com um anticorpo de detecção devem ser determinados empiricamente, idealmente usando Mesotelina recombinante como padrão.
• Como anticorpo policlonal, pode ocorrer variabilidade entre lotes; sempre realize um teste piloto com controles positivos e negativos para confirmar a reatividade e especificidade.
• Considere que o MPF solúvel endógeno no soro ou sobrenadantes de cultura celular pode ser detectado; ajuste as condições de bloqueio e lavagem de acordo para reduzir o ruído de fundo.

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