Anticorpo monoclonal de coelho anti-METTL3 [Validado por KD] para WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ChIP, ELISA - Q86U44

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da METTL3

• A METTL3 (subunidade catalítica da N(6)-adenosina-metiltransferase) é uma proteína de 64 kDa que se localiza em speckles nucleares e no citoplasma. Ela forma um complexo heterodimérico com a METTL14, constituindo o núcleo catalítico responsável por depositar modificações m6A no RNA.
  Referências relacionadas:
  PMID:27281194
  PMID:27373337
  PMID:27627798
• A METTL3 deposita m6A na sequência consenso 5′-[AG]GAC-3′ do mRNA, regulando a estabilidade, o processamento, a eficiência de tradução e a edição dos transcritos.
  Referências relacionadas:
  PMID:22575960
  PMID:24284625
  PMID:25719671
• A marca m6A promove a desestabilização e a degradação do mRNA assim que os mRNAs são liberados no nucleoplasma, permitindo o controle dinâmico da expressão gênica.
  Referências relacionadas:
  PMID:28637692
• Em células-tronco embrionárias, a metilação m6A dos transcritos associados à pluripotência pela METTL3 promove sua degradação, facilitando assim a saída do estado naïve e a diferenciação.
• A METTL3 contribui para a regulação do relógio circadiano ao acelerar o processamento nuclear dos mRNAs dos genes do relógio e modular o metabolismo lipídico hepático.
  Referências relacionadas:
  PMID:30428350
• Após danos ao DNA induzidos por UV, a METTL3 é rapidamente recrutada para os locais de dano, onde catalisa a adição de m6A aos transcritos poli(A), promovendo o recrutamento da DNA polimerase κ (POLK).
  Referências relacionadas:
  PMID:28297716
• No citoplasma, a METTL3 interage com fatores de iniciação da tradução para aumentar a tradução do mRNA independentemente de sua atividade de metiltransferase; essa função está associada à proliferação de células cancerígenas.
  Referências relacionadas:
  PMID:27117702
• Durante a infecção por SARS‑CoV‑2, a METTL3 adiciona modificações m6A ao RNA viral, reduzindo a ligação do RIG-I e, consequentemente, atenuando a detecção imune inata.
  Referências relacionadas:
  PMID:33961823

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aminoácidos 1–156) da METTL3 humana. Ao utilizar este anticorpo, considere que ele pode reconhecer epítopos dentro desse fragmento; valide a ligação à METTL3 de comprimento total e às possíveis isoformas no seu sistema de amostras.
• Para Western blot, o peso molecular previsto é de aproximadamente 64 kDa. Otimize a porcentagem do gel (por exemplo, SDS-PAGE a 10%) e as condições de transferência para proteínas de tamanho intermediário. Utilize controles positivos e negativos adequados.
• A adequação relatada do anticorpo para ChIP sugere que ele pode imunoprecipitar complexos de METTL3–RNA ou de METTL3–cromatina; ajuste o grau de reticulação, a sonicação e a rigorosidade das lavagens de acordo com o seu protocolo específico.
• Na imunofluorescência (IF/ICC) e na imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para preservar o epítopo e, ao mesmo tempo, permitir o acesso do anticorpo.
• Várias aplicações são listadas; no entanto, cada laboratório deve estabelecer e otimizar o desempenho do anticorpo em suas próprias condições experimentais.

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