Anticorpo Monoclonal Anti-MITF para WB, IHC-P, ELISA - O75030

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do MITF

• MITF (Fator de transcrição associado à microftalmia) é um membro da família de fatores de transcrição basic helix-loop-helix leucine zipper (bHLH-Zip), codificado pelo gene MITF (também designado BHLHE32).
• Atua como regulador mestre da sobrevivência, diferenciação e biogênese de melanosomos em melanócitos, ligando-se às sequências de DNA da caixa M (5'-TCATGTG-3') e caixa E (5'-CACGTG-3') nos promotores de genes de pigmentação como TYR e TYRP1 (PubMed:10587587, PubMed:22647378, PubMed:27889061). Referências relacionadas: PMID:10587587 PMID:22647378 PMID:27889061
• Participa da resposta celular à disponibilidade de aminoácidos por meio da via de sinalização MTOR: em condições de abundância de nutrientes, a MTOR fosforila o MITF, levando à sua inativação; por outro lado, a inanição ou o estresse lisossomal inibem a MTOR, promovendo a desfosforilação do MITF e a ativação transcripcional (PubMed:36608670). Referências relacionadas: PMID:36608670
• Localiza-se predominantemente no núcleo, mas também é detectado no citoplasma e nas membranas dos lisossomos, refletindo seus papéis transcripcionais e de sinalização.
• É expresso em melanócitos, epitélio pigmentar da retina, cérebro, placenta e rim, sendo que a expressão em melanócitos é fundamental para a pigmentação e distúrbios relacionados.
• Múltiplas isoformas produzidas por splicing alternativo afetam a distribuição tecidual e a especificidade funcional; mutações no MITF estão associadas à síndrome de Waardenburg tipo 2A, síndrome de Tietz e síndrome COMMAD.
• É fortemente regulado por modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e ubiquitinação, que modulam sua estabilidade, afinidade de ligação ao DNA e atividade transcripcional.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 402-526 do MITF humano (NP_001341533.1), uma região que inclui o motivo de dimerização do leucine zipper; recomendamos verificar a reatividade da isoforma e a acessibilidade do epítopo no seu sistema experimental.
• Para Western blot (WB), o MITF tem um peso molecular previsto de aproximadamente 59 kDa, mas múltiplas isoformas e modificações pós-traducionais podem produzir bandas adicionais; valide usando controles positivos apropriados (ex.: linhas de células de melanoma pigmentado) e controles de carga.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação de antígeno e a diluição do anticorpo devem ser determinadas empiricamente; tecidos pigmentados como pele ou melanoma uveal podem servir como controles positivos.
• Para ELISA, recomendamos titulações checkerboard preliminares para determinar as condições ótimas de revestimento e detecção; o pareamento com anticorpos de captura validados pode melhorar a sensibilidade.
• Como o MITF é um fator de transcrição de baixa abundância, métodos de enriquecimento de amostras ou detecção de alta sensibilidade podem ser necessários para uma detecção confiável em alguns tipos de amostras.

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