Anticorpo Monoclonal Anti-MLKL de Coelho para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q8NB16

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da MLKL

• A MLKL é uma pseudocinase que carece de atividade intrínseca de proteína cinase, funcionando como um executor crítico da morte celular necroptótica induzida por TNF. Referências relacionadas: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• Após a fosforilação pela RIPK3, a MLKL sofre homotrimerização e transloca para a membrana plasmática, onde desencadeia o influxo de cálcio e a ruptura da membrana plasmática, características marcantes da necroptose. Referências relacionadas: PMID:22265413, PMID:22265414, PMID:22421439

• Além da necroptose citoplasmática, a MLKL também pode promover a necroptose nuclear durante a infecção por ortomixovírus. A ZBP1 detecta o Z-RNA viral e ativa a RIPK3 no núcleo, levando à fosforilação da MLKL, ruptura do envelope nuclear e vazamento citosólico de DNA (Por similaridade).

• A ligação da MLKL ao inositol-hexaquisfosfato (InsP6) é essencial para a sua função necroptótica, ligando a sinalização de fosfoinositídeos à execução da morte celular. Referências relacionadas: PMID:29883610

• A nível subcelular, a MLKL reside principalmente no citoplasma, mas transita para a membrana celular e para o núcleo após a ativação, consistente com os seus papéis duplos na ruptura da membrana e do envelope nuclear.

• A proteína contém um domínio de hélice superenrolada (coiled-coil) na extremidade N-terminal e um domínio de pseudocinase na extremidade C-terminal, e está sujeita a splicing alternativo, gerando isoformas que podem regular a necroptose ou ter funções desconhecidas.

• Modificações pós-traducionais, particularmente a fosforilação mediada pela RIPK3, são críticas para a ativação, oligomerização e direcionamento à membrana da MLKL; outras modificações e interações podem ajustar a sua atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado abrange os aminoácidos 369-471 dentro do domínio de pseudocinase na extremidade C-terminal da MLKL humana (NP_689862.1). Esta região é provável que reconheça tanto a proteína de comprimento total quanto quaisquer isoformas que contenham este segmento; confirme a especificidade no seu sistema modelo através de controles de RNAi ou knockout.

• Para Western blot, espera-se uma banda em torno de 54kDa para a MLKL humana. A diluição ideal deve ser determinada empiricamente usando lisados de células com necroptose induzida (por exemplo, tratamento com TNF-alfa + mimético de Smac + z-VAD-fmk) como controles positivos.

• As aplicações de IF/ICC e IHC-P podem exigir recuperação de antígenio e permeabilização otimizadas para o seu tipo de amostra. Estímulos necroptóticos podem enriquecer a MLKL na membrana plasmática, fornecendo um controle de localização dinâmica.

• Protocolos de ELISA podem ser desenvolvidos usando proteína MLKL recombinante ou lisados celulares; considere conjuntos de anticorpos pareados para ELISA sanduíche a fim de aumentar a sensibilidade.

• A reatividade cruzada é relatada contra humano e camundongo; no entanto, recomenda-se a validação na espécie e tecido relevantes antes de estudos em grande escala.

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