Anticorpo Monoclonal Anti-Ki67 de Rato () para Citometria de Fluxo (Intracelular) - E9PVX6

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Ki67

• Ki67, codificado pelo gene Mki67, é uma proteína marcadora de proliferação de grande porte com peso molecular de aproximadamente 351 kDa (350864 Da da UniProt) que se associa aos cromossomos mitóticos. Atua como repelente cromossômico durante a mitose inicial e como atraente cromossômico durante a mitose tardia, garantindo a dispersão e o agrupamento adequados dos cromossomos (PubMed:27362226). Referências relacionadas: PMID:27362226
• Durante a mitose inicial, o Ki67 se relocaliza dos nucléolos para a superfície dos cromossomos, formando estruturas estendidas semelhantes a escovas. Essas estruturas fornecem uma barreira estérica e eletrostática, atuando como surfactante para evitar o colapso cromossômico e permitir a motilidade independente (PubMed:27362226). Referências relacionadas: PMID:27362226
• Na anáfase, a desfosforilação do Ki67 e a exposição de uma região básica conservada desencadeiam a separação de fases líquido-líquido dependente de RNA na superfície do cromossomo, promovendo o agrupamento cromossômico e facilitando a remontagem nuclear. Essa transição de fase transforma o Ki67 de repelente em atraente.
• Ki67 liga ao DNA com preferência por DNA superenrolado e rico em AT, e também se liga a RNAs ribossômicos precoces durante a anáfase, o que contribui para a separação de fases. No entanto, não contribui para a estrutura interna dos cromossomos mitóticos (PubMed:26949251). Referências relacionadas: PMID:26949251
• Subcelularmente, o Ki67 se localiza no nucléolo durante a interfase e se transloca para a superfície dos cromossomos durante a mitose. É expresso predominantemente em células em proliferação, servindo como um marcador confiável para a ativação do ciclo celular.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e ubiquitinação, que regulam suas funções mitóticas e sua localização dinâmica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para citometria de fluxo intracelular, use um método de permeabilização compatível com antígenos nucleares, como metanol ou tampões à base de saponina, para garantir o acesso do anticorpo ao Ki67 no nucléolo e nos cromossomos.
• Faça a titulação do anticorpo entre 0,1–1 µg por 10^6 células para determinar a concentração de coloração ideal para o seu tipo de célula e protocolo específicos.
• Inclua um controle positivo, como linhas de células de rato em proliferação (por exemplo, NIH/3T3, CTLL-2) ou linfócitos primários estimulados, e um controle negativo (por exemplo, controle de isotipo ou células em repouso) para validar a especificidade da coloração.
• Fixe as células imediatamente para preservar a distribuição do Ki67; o armazenamento prolongado pode afetar a integridade do epítopo. A fixação com paraformaldeído seguida de permeabilização é o método mais utilizado.
• O conjugado é compatível com a detecção padrão por laser vermelho (633–647 nm); certifique-se de usar conjuntos de filtros adequados e compensação mínima se for realizar multiplexação.

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