Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-MSH2 (Validado por KO) para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P43246

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do MSH2

• O MSH2 é um componente central do sistema de reparo de incompatibilidade de DNA (MMR), essencial para manter a estabilidade genômica corrigindo incompatidades base-base e loops de inserção-deleção (IDLs) que surgem durante a replicação do DNA.
• Ele forma dois heterodímeros: MutSα com MSH6, que reconhece incompatidades de base única e pequenos IDLs (1–2 nucleotídeos), e MutSβ com MSH3, que reconhece IDLs maiores de até 13 nucleotídeos.
• Ao se ligar à incompatibilidade, o heterodímero MutS dobra o DNA e protege aproximadamente 20 pares de bases, recrutando subsequentemente o heterodímero MutLα (MLH1-PMS2) para formar um complexo ternário que direciona eventos de reparo a jusante, incluindo discriminação da fita, excisão e ressíntese.
• O MSH2 recruta a helicase de DNA MCM9 para a cromatina, que desenrola a fita de DNA contendo a incompatibilidade para facilitar o reparo (PubMed:26300262).
  Referências relacionadas:
  PMID:26300262
• A atividade ATPase do MutSα funciona como um interruptor molecular: a ligação à incompatibilidade desencadeia a troca ADP→ATP, induzindo uma mudança conformacional que converte o MutSα em uma pinça deslizante capaz de difundir ao longo do DNA, uma etapa crítica para o MMR.
• Além do MMR, o MSH2 também pode participar do reparo por recombinação homóloga de DNA e modula a regulação do ciclo celular e a apoptose induzidas por UV-B em melanócitos.
• O MSH2 é expresso de forma onipresente nos tecidos e localiza-se principalmente no núcleo e nos cromossomos.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação, fosforilação e ubiquitinação, e mutações no MSH2 estão associadas ao câncer colorretal hereditário não poliposo (HNPCC/síndrome de Lynch).

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot, espere uma banda específica próxima de 105 kDa. Inclua uma amostra validada por knockout (KO) para confirmar a especificidade do anticorpo.
• Em ensaios de imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode imunoprecipitar o MSH2 e seus parceiros de ligação (por exemplo, MSH6, MSH3, MLH1). Otimize as condições do tampão para preservar as interações proteicas.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), antecipe a localização nuclear. Use métodos adequados de fixação e permeabilização para garantir o acesso ao alvo.
• O imunogênio corresponde à região N-terminal (aa 1–300); epítopos nesta região provavelmente estão bem expostos e conservados, potencialmente apoiando a reatividade cruzada com rato.
• Ao usar ELISA, titule o anticorpo para determinar a concentração ideal de revestimento e a faixa de detecção; considere um formato direto ou sanduíche, dependendo do design do ensaio.

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