Anticorpo monoclonal de coelho anti-MSH6 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P52701

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do MSH6

• A proteína Msh6 de reparo de incompatibilidades do DNA, também conhecida como proteína de ligação a incompatibilidades G/T (GTBP) ou p160, é um componente do sistema de reparo de incompatibilidades do DNA (MMR) pós-replicativo.
• Heterodimeriza-se com MSH2 para formar o complexo MutS alfa, que reconhece incompatibilidades de uma única base e alças de inserção-deleção de dinucleotídeos (IDLs) no DNA, curvando a hélice e protegendo aproximadamente 20 pares de bases após a ligação.
• Após o reconhecimento da incompatibilidade, MutS alfa recruta MutL alfa para formar um complexo ternário, desencadeando eventos de reparo subsequentes, incluindo discriminação da fita, excisão e ressíntese.
• A ligação e a hidrólise de ATP atuam como um interruptor molecular: o DNA incompatível induz a troca de ADP por ATP, convertendo MutS alfa em uma braçadeira deslizante que se difunde ao longo do DNA, um processo essencial para o reparo de incompatibilidades.
• É recrutada para a cromatina nas fases G1 e S inicial por meio de seu domínio PWWP, que se liga especificamente à histona H3 trimetilada na Lys36 (H3K36me3), permitindo a marcação precoce das origens de replicação.
• Localiza-se no núcleo e nos cromossomos; mutações em MSH6 estão associadas ao câncer colorretal hereditário sem polipose (HNPCC/síndrome de Lynch) e a outras variantes de doenças.
• É anotada com as palavras-chave: dano ao DNA, reparo do DNA, ligação ao DNA, ligação ao ATP, ligação a nucleotídeos, interação hospedeiro-vírus e splicing alternativo, refletindo seus diversos papéis regulatórios.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Como o imunógeno é um peptídeo sintético do N-terminal, certifique-se de que o anticorpo reconhece a proteína nativa validando-o em um sistema que expresse MSH6 de comprimento completo, como lisados de células HeLa ou MCF7 para WB.
• Para IHC-P, otimize a recuperação antigênica (por exemplo, tampão citrato pH 6,0 ou EDTA pH 9,0) e considere que o MSH6 é nuclear; avalie a coloração em tecido de adenocarcinoma colorretal humano ou de amígdala como controles positivos.
• Em IF/ICC, permeabilize adequadamente as células para permitir o acesso aos antígenos nucleares e considere a coloração conjunta com um marcador nuclear para confirmar a localização.
• Para ELISA, pode ser necessário um anticorpo pareado contra um epítopo não sobreposto; valide com proteína MSH6 recombinante ou ensaios de competição com peptídeo.
• Como o MSH6 é uma proteína grande (153 kDa), use porcentagens de gel apropriadas (por exemplo, SDS-PAGE a 6-8%) e tempos de transferência prolongados para WB.

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