Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-MST1/STK4 para WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13043

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da MST1/STK4

• A serina/treonina-proteína quinase 4 (STK4), também conhecida como MST1, KRS2 e YSK3, é uma quinase pró-apoptótica ativada por estresse, codificada pelo gene STK4. É um componente chave da via de sinalização Hippo, que controla o tamanho dos órgãos e suprime tumores ao restringir a proliferação e promover a apoptose.
• A MST1/STK4 forma o núcleo da cascata de quinases Hippo juntamente com sua proteína reguladora SAV1, fosforilando e ativando a LATS1/2 em complexo com a MOB1, que subsequentemente fosforila e inativa os oncoproteínas YAP1 e TAZ.
• Após a clivagem pela caspase durante a apoptose, o fragmento ativo da quinase transloca-se para o núcleo, onde fosforila a histona H2B na Ser-14 (H2BS14ph), desencadeando diretamente a condensação da cromatina e a fragmentação do DNA.
• A MST1/STK4 fosforila múltiplos alvos a jusante, incluindo FOXO3 (promovendo a translocação nuclear e a morte celular), FOXO1 (regulando a transcrição de PMAIP1), SIRT1 (inibindo a desacetilação de p53 para aumentar a apoptose dependente de p53) e PKB/AKT1 (atuando como um inibidor).
• Também fosforila o receptor de andrógeno (AR) na Ser-650, suprimindo a atividade do AR ao antagonizar a formação do complexo AR-cromatina e interagindo com a sinalização de AKT1.
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática, mas a quinase ativa clivada entra no núcleo sob condições apoptóticas para exercer suas funções pró-apoptóticas.
• Embora expressa ubiquamente, os níveis da proteína MST1/STK4 são notavelmente aumentados no câncer de próstata, do estado normal ao maligno, sugerindo um papel potencial na progressão do câncer.
• As principais características estruturais incluem um domínio de serina/treonina quinase N-terminal e um domínio regulador C-terminal com um motivo de hélice-alça-hélice (coiled-coil); as modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação, e a proteína de comprimento total tem um peso molecular previsto de aproximadamente 56 kDa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 303-487 dentro da região reguladora C-terminal da MST1/STK4 humana, evitando o domínio quinase N-terminal; portanto, os anticorpos policlonais de coelho resultantes podem reconhecer epítopos conservados entre espécies com alta homologia nesta região.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda próxima a 56 kDa; no entanto, devido à clivagem pela caspase durante a apoptose, um fragmento ativo menor de aproximadamente 36 kDa também pode ser detectado em amostras apoptóticas — considere o uso de controles apropriados (por exemplo, células tratadas com estaurosporina).
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), tanto a localização citoplasmática quanto a nuclear podem ser observadas, dependendo do estado apoptótico das células; os métodos de fixação e permeabilização devem ser otimizados para este alvo.
• Para imunoprecipitação (IP), observe que o anticorpo é uma preparação policlonal e pode co-precipitar parceiros de ligação como SAV1 ou MOB1; valide em seu sistema de ensaio com controles negativos adequados.
• O desempenho em ELISA pode ser aprimorado usando o anticorpo como reagente de revestimento ou de detecção quando pareado com um anticorpo de captura monoclonal adequado e específico para MST1/STK4.
• A reatividade cruzada é relatada para humanos, camundongos e ratos; o alinhamento de sequência da região do imunógeno mostra alta conservação entre essas espécies, mas para outras espécies, verifique a homologia antes do uso.

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