Anticorpo Monoclonal Anti-NCF4/p40-phox para WB, IHC-P, IP, ELISA - Q15080

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NCF4/p40-phox

• O NCF4/p40-phox é uma subunidade do complexo da oxidase NADPH de fagócitos que gera aniões superóxido transferindo eletrões do NADPH para o oxigénio molecular.
• A proteína contém domínios SH3 e PX, classificando-a como uma proteína contendo domínios SH3 e PX 4 (SH3PXD4); também é conhecida como fator 4 da oxidase NADPH de neutrófilos.
• A ativação do complexo requer a montagem de subunidades citosólicas, incluindo o NCF4, com o complexo central ligado à membrana; este processo é iniciado pela ligação dependente de fosforilação do NCF1/p47-phox ao CYBA/p22-phox.
• A expressão do NCF4 está restrita a células hematopoiéticas.
• A nível subcelular, localiza-se no citoplasma e citosol, e associa-se a membranas de endossomas e à membrana plasmática após ativação.
• A proteína está sujeita a fosforilação e splicing alternativo, e está implicada na doença granulomatosa crónica quando defeituosa.
• O peso molecular da isoforma canónica é de aproximadamente 39 kDa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um peptídeo sintético que abrange os aminoácidos 240-339, localizado na região C-terminal do NCF4 humano. Esta região inclui parte do domínio PX e sequências adjacentes, pelo que o anticorpo pode reconhecer o NCF4 de comprimento total e potencialmente variantes de splicing que contêm este segmento.
• Para Western blotting, espera-se uma banda próxima de 39 kDa em condições redutoras; considere o uso de lisados de células hematopoiéticas (por exemplo, HL-60, neutrófilos) como controlos positivos.
• Em imuno-histoquímica, as secções embebidas em parafina podem requerer recuperação de epítopos induzida por calor; a diluição do anticorpo e as condições de incubação devem ser otimizadas em tecidos positivos conhecidos, como o baço ou a medula óssea.
• Para imunoprecipitação, o formato monoclonal de coelho frequentemente fornece alta afinidade, mas a co-imunoprecipitação dos componentes do complexo da oxidase NADPH pode requerer condições de lise suaves para manter as interações proteína-proteína.
• Em ELISA, o anticorpo produzido contra o imunogénio peptídico pode ser utilizado para detetar NCF4 recombinante ou nativo; o emparelhamento com um anticorpo específico de um epítopo diferente poderia permitir o desenvolvimento de ELISA sanduíche.

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