Anticorpo policlonal anti-NEDD4 para WB, IHC-P, ELISA - P46934

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de NEDD4

• NEDD4 (proteína 4 expressa em células precursoras neurais e regulada negativamente durante o desenvolvimento) também é conhecida como RPF1, NEDD4-1 e proteína 53 indutora da proliferação celular. É uma ligase E3 de ubiquitina do tipo HECT que desempenha funções essenciais na degradação de proteínas, na sinalização de receptores e na autofagia.
• Como ligase E3 de ubiquitina, NEDD4 aceita ubiquitina das enzimas E2 e transfere especificamente a ubiquitina para a lisina-63 dos substratos-alvo, formando cadeias de poliubiquitina. Referências relacionadas: PMID:19920177, PMID:21399620, PMID:23644597
• NEDD4 ubiquitina uma ampla variedade de substratos, incluindo receptores de fatores de crescimento (IGF1R, FGFR1, EGFR), proteínas de sinalização (RAPGEF2, TNK2, BRAT1, DAZAP2) e a maquinaria transcricional (POLR2A), direcionando muitos deles para internalização e degradação lisossomal ou proteassômica. Referências relacionadas: PMID:21765395, PMID:11598133, PMID:20086093, PMID:25631046, PMID:11342538, PMID:19920177
• O papel de NEDD4 na regulação da estabilidade de PTEN por meio da poliubiquitinação tem sido debatido; alguns estudos sugerem uma ligação direta, enquanto outros a questionam. Referências relacionadas: PMID:18562292, PMID:17218260
• NEDD4 atua como uma plataforma para recrutar USP13, formando um complexo de desubiquitinação que cliva as cadeias de ubiquitina ligadas à Lys-48 de VPS34, estabilizando VPS34 e promovendo a formação de autofagossomos. Referências relacionadas: PMID:32101753
• Durante a infecção viral, NEDD4 ubiquitina a proteína VP40 do vírus Ebola, contribuindo para a brotamento viral.
• NEDD4 localiza-se no citoplasma, no núcleo e na membrana celular, e sofre modificações pós-traducionais, incluindo acetilação e fosforilação.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 160-460, uma região central de NEDD4 humano, sugerindo que o anticorpo pode reconhecer múltiplas isoformas ou domínios funcionais; recomenda-se a validação no sistema de amostra pretendido.
• Para western blotting, o peso molecular previsto é de aproximadamente 149 kDa; considere usar um gel de menor porcentagem (por exemplo, 6-8%) e tempos de transferência prolongados para garantir a transferência eficiente de proteínas de alto peso molecular.
• Na imuno-histoquímica (tecidos incluídos em parafina), pode ser necessário otimizar as condições de recuperação antigênica; inclua controles positivos e negativos apropriados para confirmar a especificidade.
• Para ELISA, a natureza policlonal pode proporcionar alta avidez; avalie o desempenho tanto como anticorpo de captura quanto de detecção e valide-o com padrões recombinantes relevantes.

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